магистрант 1 курса факультета ветеринарно-санитарной экспертизы
1st year master's student of the Faculty of Veterinary and Sanitary Examination
гл. агроном отдела молекулярных исследований Северо-Западной испытательной лаборатории
Chief Agronomist of the Department of Molecular Research of the SZ-IL
магистрант 1 курса факультета ветеринарно-санитарной экспертизы
1st year master's student of the Faculty of Veterinary and Sanitary Examination
канд. ветеринар. наук, доц. кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы
PhD of veterinary science, Associate Professor
канд. ветеринар. наук, доц. кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы
PhD of veterinary science, Associate Professor
Многоядная муха-горбатка (лат. Megaselia scalaris (Loew)) является карантинным объектом в Российской Федерации и внесена в Единый перечень карантинных объектов Евразийского экономического союза, утвержденный Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 30.11.2016 № 158, т.к. является переносчиком опасных заболеваний, несущих большой экономический ущерб. Ареал охватывает большие территории Северной Америки, Африки, южной части Европы, Австралии, Юго-Восточной Азии, а также европейскую часть России, а именно Южный федеральный округ и республика Крым. Перечень подкарантинной продукции, подлежащей исследованиям с целью выявления M. scalaris (Loew) очень обширный, а точная идентификации до вида полученных образцов энтомологическим методом по морфологическим признакам копулятивных органов затруднена. Поэтому для идентификации разработаны методы молекулярной диагностики, а именно сравнение исследуемой нуклеотидной последовательности с референсной, с помощью базы NCBI и определение генетических дистанций. Исследования проводили в отделе молекулярных исследований Северо-Западной испытательной лаборатории ФГБУ «ВНИИЗЖ». В работе использовалось 6 образцов рода Megaselia. На первом этапе выделяли ДНК при помощи наборов «ДНК-Экстран 2». Затем генетические маркеры получали методом классической ПЦР с последующей детекцией с помощью электрофореза, используя прибор T100 Thermal Cycler, секвенировли на генетическом анализаторе 3500 Genetic Analyzer. Идентификацию проводили путем сравнения полученной последовательности в программе BioEdit при помощи базы NCBI и путем расчета генетических дистанций, используя двухпараметрическую модель Кимуры и модель Тадзимы-Нэя. В ходе исследования были выявлены преимущества и недостатки представленных методов молекулярной идентификации.
Ant-decapitating flies (lat. Megaselia scalaris (Loew)) is a quarantine object in the Russian Federation and is included in the Single list of quarantine objects of the Eurasian Economic Union, approved by the of the Council of the Eurasian Economic Commission dated 30.11.2016 No. 158, because it is a vector of dangerous diseases that cause great economic damage. The range covers large areas of North America, Africa, southern Europe, Australia, Southeast Asia, as well as the European part of Russia, namely the Southern Federal District and the Republic of Crimea. The list of regulated products subject to research to identify M. scalaris (Loew) is very extensive, and accurate identification to species of the received samples by entomological method by morphological features of copulatory organs is very labor-intensive and not accurate. Therefore, methods of molecular diagnostics were developed for identification, namely, comparison of the studied nucleotide sequence with the reference one using NCBI database and determination of genetic distances. The studies were carried out on the basis of the Department of Molecular Research of the North-West Testing Laboratory of FGBU «ARRIAH». Six samples of the genus Megaselia were used in this work. At the first stage, DNA was isolated using DNA-Extran 2 kits. Then genetic markers were obtained by classical PCR with subsequent detection by electrophoresis using the T100 Thermal Cycler, sequenced on a 3500 Genetic Analyzer. Identification was performed by comparing the obtained sequence in BioEdit program using NCBI database and by calculating genetic distances using two-parameter Kimura model and Tajima-Nei model. The study revealed advantages and disadvantages of the presented methods of molecular identification.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.