В репродуктивных технологиях, используемых в животноводстве, применение лиофилизированного семени возможно только с помощью технологии ИКСИ, ввиду полной потери подвижности сперматозоидов. Однако, особенности анатомического строения и развития яйцеклетки птиц не позволяют применять данную технологию. Стратегии, направленные на сохранение кинетического аппарата  лиофилизированных  сперматозоидов,  являются  наиболее  актуальными  для  птиц. Повышение митохондриальной активности клеток ввиду ее связи с энергетическим обменом и подвижностью сперматозоидов может являться одним из путей решения данной проблемы. Однако, подобных исследований по по лиофилизированному семени птиц до сих пор не было проведено. В представленном исследовании оценивалось влияние митохондриально-направленного  антиоксиданта Mito-TEMPO на  жизнеспособность,  мембранный  потенциал  митохондрий  и  генерацию  внутриклеточного  пероксида  водорода сперматозоидами петухов в цикле криоконсервации и лиофилизации. Доля клеток с интактной плазматической мембраной в лиофилизированной сперме была выше при использовании разбавителей, содержащих антиоксидант. Добавление Mito-TEMPO в концентрации 40 µМ к разбавителям Т-20 и Т-30 для целей криоконсервации семени с последующей лиофильной сушкой, позволило увеличить долю клеток с интактной плазматической мембраной в лиофилизированном семени в сравнении с контрольными разбавителями (6,12±0,11% против 10,19±0,46% и 13,19±1,30% против 15,23±1,13% соответственно, p˂0,05).  Эффективная концентрация Mito-TEMPO в разбавителях, предназначенных только для криоконсервации семени, была значительно ниже – 5 µМ. Доля клеток с интактной плазматической мембраной составила 47,97±0,64% против 55,85±1,69% и 47,25±2,97% против 63,21±1,78%, соответственно, p˂0,05. Доказан  дозозависимый эффект трегалозы в составе криозащитных разбавителей.