ivmМеждународный вестник ветеринарииInternational Journal of Veterinary Medicine2072-2419SpbGUVM Publishing House10.52419/issn2072-2419.2024.4.35ivm-1503Research ArticleИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИINFECTIOUS DISEASESКонтроль жизнеспособности и стабильности биологических свойств референтного штамма Brucella canis RM 6/66 при длительном храненииControl of viability and stability of biological properties of the refeence Brucella canis RM 6/66 strain during long-term storagehttps://orcid.org/0000-0003-4446-4619ПанковаЕ. В.PankovaE. V.

Панкова Е.В. – канд. биол. наук, вед. науч. сотр. 

Pankova E.V. – Candidate of Biological Sciences, Leading Researcher 

katerinka_ja@bk.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6204-6077АртемьеваЕ. А.ArtemevaE. A.

Артемьева Е.А. – канд. ветеринар. наук, ст. науч. сотр., нач. отдела - Государственная коллекция микроорганизмов 

Artemeva E.A. – Candidate of Veterinary Sciences., Senior Researcher, Head of Department – State Collection of Microorganisms

https://orcid.org/0000-0002-0159-3843МельниковаЛ. А.MelnikovaL. A.

Мельникова Л.А. – канд. ветеринар. наук, вед. науч. сотр. 

Melnikova L.A. - Candidate of Veterinary Sciences., Leading Researcher

https://orcid.org/0000-0002-1997-5575МустафинаЭ. Н.MustafinaE. N.

Мустафина Э.Н. – канд. ветеринар. наук, вед. науч. сотр. 

Mustafina E.N. - Candidate of Veterinary Sciences., Leading Researcher

https://orcid.org/0000-0002-0416-6193ГромоваЕ. А.GromovaE. A.

Громова Е.А. – канд. биол. наук, ст. науч. сотр. 

Gromova E.A. - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher

ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»РоссияFederal State Budgetary Scientific Institution «Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological safety»Russian Federation202416012025043542Copyright © Панкова Е.В., Артемьева Е.А., Мельникова Л.А., Мустафина Э.Н., Громова Е.А., 20242024Панкова Е.В., Артемьева Е.А., Мельникова Л.А., Мустафина Э.Н., Громова Е.А.Pankova E.V., Artemeva E.A., Melnikova L.A., Mustafina E.N., Gromova E.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vetjournal.spbguvm.ru/jour/article/view/1503

Бруцеллез собак, вызываемый бруцеллой вида canis, все больше приобретает важное эпизоотологическое и эпидемиологическое значение во всем мире и наносит большой экономический ущерб собаководству. Сохранение патогенов в жизнеспособном состоянии с их первоначальными свойствами в течение длительного времени имеет первостепенное значение при разработке и производстве биопрепаратов профилактического, диагностического и лечебного назначения. Данную функцию выполняют Государственные коллекции микроорганизмов. Целью данной работы было изучить референтный штамм Brucella canis RM 6/66, хранившийся более 20 лет в лиофилизированном виде, определив его жизнеспособность и изучив биологические свойства, и таксономическую принадлежность. Полученные нами результаты показали, что исследуемый штамм при посеве на питательные среды, соответствующие данному виду возбудителя. Исследование его биологических свойств, с помощью тестов для определения диссоциации, показало, что штамм диссоциирован, в виду чего проведен отбор и отсев колоний, окрашенных по Уайт-Вилсону. Получена чистая культура штамма Brucеlla canis RM 6/66 в R-форме (колонии темно-фиолетовые, с ровными краями и неровной поверхностью). Использование ПЦР-РВ метода идентификации с применением видоспецифичных праймеров и TagMan-зонда, показало, что штамм B. canis RM 6/66 по всем десяти локусам соответствует представленному в международных базах, данных референтному штамму.

Brucellosis is a particularly dangerous infectious disease that causes enormous economic damage to livestock farms specializing in the breeding of cattle, sheep and pigs. Preservation of pathogens in a viable state with their original properties over a long period is one of the main tasks of the State collections of microorganisms. The aim of this paper was to study the reference strain Brucella canis RM 6/66, stored for more than 20 years in lyophilized form, determining its viability and investigating its biological properties and taxonomic affiliation. The obtained results are showed that the studied strain, when seeded on nutrient media corresponding to this species of pathogen, is viable. The study of its biological properties, using tests to determine dissociation, showed that the strain was dissociated, due to which a selection and cultivation of colonies according to White-Wilson. The pure culture of the strain of Brucеlla canis RM 6/66 in the R-form was obtained, (colonies are dark purple, with smooth edges and an uneven surface). The use of the RT-PCR identification method using species-specific primers and a TagMan probe showed that the strain B. canis RM 6/66 corresponds to the reference strain presented in international databases at all ten loci. 

штаммыпатогенысохранное депонированиеколлекции микроорганизмовбиопрепаратыstrainspathogenssafe depositcollection of microorganismsbio drugsМатериалы подготовлены за счет средств ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в рамках научно-исследовательской работы по теме «Изучение биологических характеристик штаммов заразных и особо опасных болезней животных и их стабильности в процессе длительного хранения»The materials were prepared using the funds of the Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety within the research “Study of the biological characteristics of strains of infectious and especially dangerous animal diseases and their stability during long-term storage”.ReferencesCarmichael L. E., Kenney R. M. Canine abortion caused by Brucella canis // Journal of the American Veterinary Medical Association. 1968. № 6 (152). Р. 605-616.Carmichael L. E., Kenney R. M. Canine abortion caused by Brucella canis // Journal of the American Veterinary Medical Association. 1968. № 6 (152). Р. 605-616.Вершилова П.А. Бруцеллез. М.: Медицина, 1972. 439 с.Vershilova P.A. Brucellosis. Moscow: Medicine, 1972. 439 p. (In Russ.)Косилов И.А. Изменчивость бруцелл и ее значение в проблеме бруцеллеза сельскохозяйственных животных: автореф. на соиск. ученой степ. д-ра вет. наук: 16.00.03 -ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология. Фрунзе, 1975. 39 с.Kosilov I.A. Brucella variability and its importance in the problem of brucellosis of farm animals: author's abstract for a dissertation for a doctor of veterinary sciences: 16.00.03 - veterinary epizootology, mycology with mycotoxicology and immunology. Frunze, 1975. 39 p. (In Russ.)Генджиева О.Б., Руденко А.В. Эпизоотология и эпидемиология бруцеллеза в республике Калмыкии // Вестник Калмыкского универститета. 2013. № 1(17). С.10-15. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-2-23-27.Gendzhieva O.B., Rudenko A.V. Epizootology and epidemiology of brucellosis in the Republic of Kalmykia // Bulletin of the Kalmyk University. 2013. № 1 (17). P.10-15. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-2-23-27. (In Russ.)СанПиН 3.3686-21. Санитарноэпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней: санитарно-эпидемиологические правила и нормативы: издание официальное: утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача РФ А. Ю. Поповой 28 января 2021 г. № 4: введены впервые: дата введения 2021-01-09 // Официальный электронный фонд правовых и нормативно-технических документов. – URL: https://docs.cntd.ru/document/573660140 (дата обращения: 24.08.2024).SanPiN 3.3686-21. Sanitary and epidemiological requirements for the prevention of infectious diseases: sanitary and epidemiological rules and regulations: official publication: approved by the resolution of the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation A. Yu. Popova on January 28, 2021, No. 4: introduced for the first time: date of introduction 2021-01-09 // Official electronic fund of legal and regulatory and technical documents. - URL: https://docs.cntd.ru/document/573660140 (date of access: 08/24/2024). (In Russ.)Cordon J.C., Pue H.L., Rutgers H.C. Canine brucellosis in Nouschold // J.A.V.M.A. 1985. № 7(186). P. 695-698. DOI: 10.3389/fvets.2021.594291.Cordon J.C., Pue H.L., Rutgers H.C. Canine brucellosis in Nouschold // J.A.V.M.A. 1985. № 7(186). P. 695-698. DOI: 10.3389/fvets.2021.594291.Р. Юсупова. Обеспечение благополучия свиноводческих хозяйств от особо опасных инфекций // Доклад заместителя директора ФГБУ «ФЦТРБВНИВИ» (Казань) на Международном ветеринарном конгрессе в Казани. URL: https://soyanews.info/news/obespechenie_blagopoluchiya_svinovodcheskikh_khozyaystv_ot_osobo_opasnykh_infekts.html (дата обращения: 24.08.2024).R. Yusupova. Ensuring the welfare of pig farms from especially dangerous infections // Report of the Deputy Director of the Federal State Budgetary Institution "FCTRBVNIVI" (Kazan) at the International Veterinary Congress in Kazan. URL: https://soyanews.info/news/obespechenie_blagopoluchiya_svinovodcheskikh_khozyaystv_ot_osobo_opasnykh_infekts.html (date of access: 08/24/2024). (In Russ.)Зинова А.А. Разработка РИД-тестсистемы для диагностики бруцеллеза собак, вызываемого В. canis: автореф. на соиск. ученой степ. канд. биол. наук: 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологиеи и иммунология. М., 2009. 22 с.Zinova A.A. Development of a RID test system for the diagnosis of canine brucellosis caused by B. canis: author's abstract for a dissertation on the scientific degree of Cand. Sci. (Biol.): 16.00.03 - veterinary microbiology, virology, epizootology, mycology with mycotoxicology and immunology. Moscow, 2009. 22 p. (In Russ.)Артемьева Е. А., Мельникова Л. А., Родионов А. П. К 45-летию деятельности Государственной коллекции штаммов – возбудителей особо опасных болезней, используемых в ветеринарии и животноводстве // Инновационные решения актуальных вопросов биобезопасности: материалы Международной научнопрактической конференции. Казань. 2022. С. 145-148.Artemyeva E. A., Melnikova L. A., Rodionov A. P. On the 45th anniversary of the State Collection of Strains - Pathogens of Particularly Dangerous Diseases Used in Veterinary Medicine and Animal Husbandry // Innovative Solutions to Current Biosafety Issues: Proceedings of the International Scientific and Practical Conference. Kazan. 2022. P. 145-148. (In Russ.)Общие фармакопейные статьи на препараты пробиотики для государственной фармакопеи РФ XIII издания - первый опыт в мировой фармакопейной практике / И.Г. Осипова [и др.] // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2016. № 6(2): С. 272–277.General Pharmacopoeia Articles on Probiotic Preparations for the State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIII Edition - the First Experience in World Pharmacopoeial Practice / I. G. Osipova [et al.] // International Journal of Applied and Fundamental Research. 2016. № 6 (2): P. 272–277. (In Russ.)Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты. М.: Колос, 1981. 448 с.Osidze D. F. Veterinary Preparations. Moscow: Kolos, 1981. 448 p. (In Russ.)Гришкина Т.А., Тимофеева Е.В., Спиридонов В.А. Оценка результатов хранения музейных штаммов возбудителя сапа в течение длительного периода // Проблемы особо опасных инфекций. 2004. № 87. С. 40-42.Grishkina T.A., Timofeeva E.V., Spiridonov V.A. Evaluation of the results of storage of museum strains of the glanders pathogen over a long period // Problems of especially dangerous infections. 2004. № 87. P. 40-42. (In Russ.)Цуцаева А.А., Ананьина А.Е. Изучение влияния некоторых параметров процесса лиофилизации на жизнеспособность споровой культуры Strepfomyces fradiae ВНИИГ – 25А // Проблемы криобиологии. 2002. № 2. С. 26–915. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-3-66-70.Tsutsaeva A.A., Ananyina A.E. Study of the influence of some parameters of the lyophilization process on the viability of the spore culture of Strepfomyces fradiae VNIIG - 25A // Problems of cryobiology. 2002. № 2. P. 26-915. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-3-66-70. (In Russ.)ГОСТ 33675-2015. Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Бактериологические методы: межгосударственный стандарт Российской Федерации: издание официальное: утвержден и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 ноября 2015 г. № 1949-ст: введен впервые: дата введения 2017-01-01 / разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»). М.: Стандартинформ, 2016. 20 с.GOST 33675-2015. Animals. Laboratory diagnostics of brucellosis. Bacteriological methods: interstate standard of the Russian Federation: official publication: approved and put into effect by order of the Federal Agency for Technical Regulation and Metrology dated November 24, 2015 No. 1949- st: introduced for the first time: date of introduction 2017-01-01 / developed by the Federal State Budgetary Institution "All-Russian State Center for Quality and Standardization of Animal Medicines and Feed" (FGBU "VGNKI"). Moscow: Standartinform, 2016. 20 p. (In Russ.)Подбор оптимальных условий постановки ПЦР для идентификации возбудителя бруцеллеза собак / Е. А. Анисимова [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2023. № 12(230). С. 55-59. DOI: 10.53083/1996-4277-2023-230-12-55-59.Selection of optimal conditions for setting up PCR to identify the causative agent of canine brucellosis / E. A. Anisimov [et al.] // Bulletin of the Altai State Agrarian University. 2023. № 12 (230). P. 55-59. DOI: 10.53083/1996-4277-2023-230-12-55-59. (In Russ.)Разработка мультиплексной ПЦР-РВ тест-системы для выявления возбудителя бруцеллеза / Е. А. Громова [и др.] // Ветеринарный врач. 2024. № 3. С. 34 – 4018. DOI: 10.33632/1998-698Х_2024_3_34.Development of a multiplex PCR-RV test system for detecting the causative agent of brucellosis / E. A. Gromova [et al.] // Veterinary doctor. 2024. № 3. P. 34 – 4018. DOI: 10.33632/1998-698Х_2024_3_34. (In Russ.)Изучение морфологических свойств изолятов бруцелл в S- и R-формах электронно-микроскопическим методом / А. Р. Сансызбай [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2013. № 12 (110). С. 074-079.Study of morphological properties of Brucella isolates in S- and R-forms by electron microscopy / A. R. Sansyzbay [et al.] // Bulletin of the Altai State Agrarian University. 2013. № 12 (110). P. 074-079. (In Russ.)Применение HRM-анализа кривых плавления, полученных после амплификации VNTR-локусов, для идентификации и дифференциации штаммов бруцелл / Е.А. Анисимова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. 2023. № 4. С. 42–49. DOI: 10.21055/0370-1069-2023-4-42-49.Application of HRM analysis of melting curves obtained after amplification of VNTR loci for identification and differentiation of Brucella strains / E. A. Anisimov [et al.] // Problems of especially dangerous infections. 2023. № 4. P. 42–49. DOI: 10.21055/0370-1069-2023-4-42-49. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.