Хаммадов Н.И. – канд. биол. наук, вед. науч. сотр.
Кhammadov N.I. – Candidate of Biological Sciences, Leading Researcher
Галеева А.Г. – канд. ветеринар. наук, ст. науч. сотр., зав. лаб. вирусных антропозоонозов
Galeeva A.G. – Candidate of Veterinary Sciences, Senior researcher, head of the Lab of Viral Antropozoonoses
Горбунова М.Е. – канд. биол. наук, науч. сотр.
Gorbunova M.E. - Candidate of Biological Sciences, Researcher
Сальманова Г.Р. – аспирант
Salmanova G.R. – postgraduate student
Громова Е.А. – канд. биол. наук, ст. науч. сотр.
Gromova E.A. – Candidate of Biological Sciences, Senior researcher
Хамидуллина А.И. – студ. 5 курса факультета ветеринарной медицины
Khamidullina A.I. - 5th year student of the Faculty of Veterinary Medicine
Ефимова М.А. – д-р биол. наук, вед. науч. сотр.
Efimova M.A. – Doctor of Biological Sciences, leading researcher
На сегодняшний день к единственному эффективному средству борьбы с вирусом артрита-энцефалита коз (ВАЭК) относят его раннюю диагностику и убой всех животных в неблагополучных и подозреваемых в неблагополучии хозяйствах, поскольку специфические меры профилактики не разработаны. Из широкодоступных средств для диагностических исследований можно выделить ПЦР индикацию генома ВАЭК и выявление специфических антител вируса, которое напрямую зависит от серологической активности и специфичности применяемых в диагностических наборах антигенов. Настоящая работа посвящена разработке рекомбинантного антигена для серологической индикации антител против ВАЭК. В результате биоинформационного анализа был выполнен поиск аминокислотных последовательностей белков вируса, анализ иммуногенных эпитопов данных белков, поиск сайтов N-, О- гликозилирования, сайтов сигнального пептида и трансмембранных доменов. На основе полученных данных произведен дизайн рекомбинантного мультиэпитопного антигена со следующей аминокислотной последовательностью «mqktnepyedfaarlleaidaepipvgaeiipesmkylrgaksqgklneeaerwrrnnppppavraytygviempenyakvcqplvqiyrtlstptyqhhhhhh». Сконструированная аминокислотная последовательность после перевода ее в нуклеотидную с учётом кодонной оптимизации продуцирования белка в Escherichia coli, клонирована в состав экспрессирующей конструкции на основе вектора pET28а (+). В результате конструирования длина созданной плазмиды для экспрессии нуклеотидной последовательности ВАЭК составила 5527 п.н. Наработанный и отчищенный методом аффинной хроматографии белок, содержащий в своём составе аминокислотные последовательности иммуногенных эпитопов антигенов ВАЭК, подтвердил своюфункциональность в непрямом твердофазном иммуноферментном анализе с применением сывороток крови коз с подтверждённым ранее иммунным статусов к данному вирусу. Представленный в настоящей работе рекомбинантный мультиэпитопный антиген может найти широкое применение в качестве составляющего компонента при разработки диагностических тест-систем.
To date, the only effective means of combating goat arthritis-encephalitis viruses (CAEV) includes its early diagnosis and slaughter of all animals in dysfunctional and suspected farms, since specific preventive measures have not been developed. Among the widely available tools for diagnostic studies, PCR indication of the CAEV genome and the detection of specific antibodies of the virus can be distinguished, which directly depends on the serological activity and specificity of the antigens used in diagnostic kits. This work is devoted to the development of a recombinant antigen for serological indication of antibodies against CAEV. As a result of bioinformatic analysis, a search was performed for amino acid sequences of virus proteins, an analysis of immunogenic epitopes of these proteins, a search for N-, O-glycosylation sites, signal peptide sites and transmembrane domains. Based on the data obtained, a recombinant multiepitope antigen was designed with the following amino acid sequence "mqktnepyedfaarlleaidaepipvgaeiipesmkylrgaksqgklneeaerwrrnnppppavraytygviempenyakvcqplvqiyrtlstptyqhhhhhh». The constructed amino acid sequence, after converting it to a nucleotide one, taking into account the codon optimization of protein production in Escherichia coli, was cloned into an expression construct based on the pET28a(+) vector. As a result of the design, the length of the created plasmid for the expression of the nucleotide sequence of the CAEV was 5527 bp. The protein developed and purified by affinity chromatography, containing amino acid sequences of immunogenic epitopes of the CAEV antigens, confirmed its functionality in indirect solid-phase enzyme immunoassay using blood sera from goats with previously confirmed immune status to this virus. The recombinant multiepitope antigen presented in this paper can be widely used as an integral component in the development of diagnostic test systems.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.