ivmМеждународный вестник ветеринарииInternational Journal of Veterinary Medicine2072-2419SpbGUVM Publishing House10.52419/issn2072-2419.2025.2.54ivm-1686Research ArticleИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИINFECTIOUS DISEASESРазработка олигонуклеотидных праймеров для идентификации материала вируса весенней виремии карпа (Cyprinus carpio) полимеразно-цепной реакцииDevelopment of oligonucleotide primers for identification of the spring carp viremia virus (Cyprinus carpio) by polymerase chain reactionhttps://orcid.org/0000-0001-5944-3808СибгатулловаА. К.SibgatullovaA. K.

канд. ветеринар. наук, доц. каф. «Биологии, экологии, паразитологии, водных биоресурсов и аквакультуры»

Ph.D. of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Department of Biology, Ecology, Parasitology, Aquatic Bioresources and Aquaculture

https://orcid.org/0000-0002-8402-6798ПадилоЛ. П.PadiloL. P.

канд. биол. наук, доц. каф. «Болезни животных и ветеринарносанитарная экспертиза»

Ph.D. of Biological Sciences, Associate Professor of the Department of Animal Diseases and Veterinary and Sanitary Expertise

https://orcid.org/0000-0001-6991-7253АгольцовВ. А.AgoltsovV. A.

д-р ветеринар. наук, проф. каф. «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза» 

Doctor of Biological Sciences, Professor, Professor of the Department of Animal Diseases and Veterinary and Sanitary Expertise

https://orcid.org/0000-0001-8584-8251ЧерныхО. Ю.ChernykhO. Yu.

д-р ветеринар. наук, проф. каф. «Микробиология, эпизоотология и вирусология», директор 

Doctor of Biological Sciences, Professor, Director Laboratory

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина»РоссияUlyanovsk State Agrarian University named after P.A. StolypinRussian FederationФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии имени Н.И. Вавилова»РоссияSaratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. VavilovRussian FederationФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет им. И.Т. Трубилина»; ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»РоссияKuban State Agrarian University named after I.T. Trublin; GBU CC "Kropotkin regional Veterinary Laboratory"Russian Federation202501082025025461Copyright © Сибгатуллова А.К., Падило Л.П., Агольцов В.А., Черных О.Ю., 20252025Сибгатуллова А.К., Падило Л.П., Агольцов В.А., Черных О.Ю.Sibgatullova A.K., Padilo L.P., Agoltsov V.A., Chernykh O.Y.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vetjournal.spbguvm.ru/jour/article/view/1686

Весенняя виремия карпа является контагиозным заболеванием, поражающая карповых, в первую обыкновенного карпа (Cyprinus carpio). Это заболевание является эндемичным в Европе, Америке и ряде азиатских стран, где оно вызывает значительную заболеваемость и смертность пораженных рыб. Международное эпизоотическое бюро включило весеннюю виремию карпа в список заболеваний, подлежащих уведомлению. Вирус выделяется в основном с калом и мочой клинически инфицированных рыб и самими носителями. Диагноз должен быть подтверждён нейтрализацией вируса или полимеразной цепной реакцией (ПЦР) и анализом нуклеотидной последовательности продуктов ПЦР. Статья посвящена разработке праймеров для полимеразно-цепной реакции в режиме реального времени с целью обнаружения геном вируса весенней виремии карпа. Исследования проводились на базе ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория» в Краснодарском крае, г. Кропоткин. У карпов отбор проб осуществлялся путем взятия тканевого материала и экссудата из брюшной полости. Подбор праймеров осуществлялся на кафедре «Биологии, экологии, паразитологии, водных биоресурсов и аквакультуры» ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ. Материалом исследования служили 4 пробы органов от карповых рыб поступившие в ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория». Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени проводили в объеме реакционной смеси 25 мкл на 1 пробу РНК. Детекция исследуемых образцов осуществлялась на амплификаторе «CFX 96 Bio-Rad». Флуоресценцию измеряли по каналам на 5` конце с красителем FAM/green и на 3`- конце гасителем BHQ1. В результате проведения ПЦР-РВ были выявлены 6 кривых флуоресценции, вместе с двумя положительными контролями пересекающие линию Threshold. Полученные результаты проведенной реакции свидетельствуют об их хорошей воспроизводимости и достоверности. Созданные нами праймеры на весеннюю виремию карпа можно применять в научно-исследовательских и диагностических целях при проведении лабораторных исследований.

Spring carp viremia is a contagious disease affecting cyprinids, primarily the common carp (Cyprinus carpio). The disease is endemic in Europe, America and several Asian countries, where it causes significant morbidity and mortality in affected fish. The Office International des Epizooties (OIE) has included spring carp viremia (SCV) in the list of notifiable diseases. The virus is excreted mainly in the faeces and urine of clinically infected fish and by the carriers themselves. Diagnosis should be confirmed by virus neutralization or polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequence analysis of the PCR products. There is no treatment for spring carp viremia. This article is devoted to the development of primers for real-time polymerase chain reaction to detect the genome of the spring carp viremia virus. The studies were conducted at the Kropotkin Regional Veterinary Laboratory in Kropotkin, Krasnodar krai. Carp samples were collected by taking tissue material and exudate from the abdominal cavity. Primers were selected at the Department of Biology, Ecology, Parasitology, Aquatic Bioresources and Aquaculture of the Ulyanovsk State Agrarian University. The study material included 4 organ samples from carp fish received by the Kropotkin Regional Veterinary Laboratory. Real-time polymerase chain reaction was performed in a reaction mixture volume of 25 μl per 1 RNA sample. The samples under study were detected using a CFX 96 Bio-Rad (USA) amplifier. Fluorescence was measured by channels at the 5` ends with FAM/green dye and at the 3` ends with BHQ1 quencher. As a result of the RTPCR, 6 fluorescence curves were identified, together with two positive controls, crossing the Threshold line. The values of the "Ct" indicator ranged from 13 to 35. The obtained results of the reaction indicate their good reproducibility and reliability.

весенная виремия карпавирускарпрыбыпраймерыполимеразная цепная реакцияspring viremia of carpviruscarpfishprimerspolymerase chain reactionReferencesБарышникова, Е. И. Диагностика весенней виремии карпа методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени / Е. И. Барышникова, М. Е. Сенина, Ю. П. Щелкунова // Ветеринария. – 2022. – № 11. – С. 66-72.Baryshnikova, E. I. Diagnostics of spring viremia of carp by the RT-PCR method in real time / E. I. Baryshnikova, M. E. Senina, Yu. P. Shchelkunova // Veterinary Science. - 2022. - No. 11. - P. 66-72.Завьялова Е.А., Дрошнев А.Е., Булина К.Ю., Карпова М.А. Мониторинг эпизоотической ситуации по болезням рыб: факты и перспективы. Труды ВИЭВ. 2018; 80 (1):182 – 189.Завьялова Е.А., Дрошнев А.Е., Булина К.Ю., Карпова М.А. Мониторинг эпизоотической ситуации по болезням рыб: факты и перспективы. Труды ВИЭВ. 2018; 80 (1):182 – 189.Грищенко, Л. И. Патолого-морфологические изменения и патогенез при весенней виремии карпов / Л. И. Грищенко // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. – 2015. – № 1. – С. 23-25.Grishchenko, L. I. Pathological and morphological changes and pathogenesis in spring viremia of carps / L. I. Grishchenko // Russian Veterinary Journal. Farm animals. – 2015. – No. 1. – P. 23-25.Пичуева, А. А. Вспышка весенней виремии карповых рыб в Приволжском федеральном округе РФ в 2014 году / А. А. Пичуева, М. И. Доронин // Ветеринария сегодня. – 2015. – № 4(15). – С. 66-70.Pichueva, A. A. Outbreak of spring viremia of carp fish in the Volga Federal District of the Russian Federation in 2014 / A. A. Pichueva, M. I. Doronin // Veterinary Science Today. – 2015. – No. 4(15). – P. 66-70.Ahne W., Spring viremia of carp (SVC) / W. Ahne, H.V. Björklund, S. Essbauer [et al.] // Dis.Aquat. Organ. – 2002. - № 52. – P. 261–272.Ahne W., Spring viremia of carp (SVC) / W. Ahne, H.V. Björklund, S. Essbauer [et al.] // Dis.Aquat. Organ. – 2002. - № 52. – P. 261–272.Грищенко Л.И., Акбаев М. Ш. Болезни рыб и основы рыбоводства. М.: Колос, 2013. – С. 456.Грищенко Л.И., Акбаев М.Ш. Болезни рыб и основы рыбоводства.М.: Колос, 2013. – С. 456.Miller O. Phylogenetic analysis of spring virema of carp virus reveals distinct subgroups with common origins for recent isolates in North America and the UK [et al.] O. Miller, F.G. Fuller, Gebreyes W.A.// Diseases of Aquatic Organisms. – 2007. – Vol. 76. P. 193-204.Miller O. Phylogenetic analysis of spring virema of carp virus reveals distinct subgroups with common origins for recent isolates in North America and the UK [et al.] O. Miller, F.G. Fuller, Gebreyes W.A.// Diseases of Aquatic Organisms. – 2007. – Vol. 76. P. 193-204.Garcia-Valtanen P. Autophagy-inducing peptides from mammalian VSV and fish VHSV rhabdoviral G glycoproteins (G) as models for the development of new therapeutic molecules. / P. García-Valtanen, M. M. Ortega-Villaizán, A. Martínez-López. [et al.]// Autophagy. -2014. – Vol.10. P.1666– 1680.Garcia-Valtanen P. Autophagy-inducing peptides from mammalian VSV and fish VHSV rhabdoviral G glycoproteins (G) as models for the development of new therapeutic molecules / P. García-Valtanen, M. M. Ortega-Villaizán, A. Martínez-López. [et al.]// Autophagy. -2014. – Vol.10. P.1666– 1680.Usama Ashraf, Spring viraemia of carp virus: recent advances/ Usama Ashraf, Lu Yuanan , Lin Li [et al.]// Journal of General Virology. – 2016. – Vol. 97. P. 1037–1051.Usama Ashraf, Spring viraemia of carp virus: recent advances/ Usama Ashraf, Lu Yuanan , Lin Li [et al.]// Journal of General Virology. – 2016. – Vol. 97. P. 1037–1051.Zhang Q., Gui J. F. Virus genomes and virus–host interactions in aquaculture animals // Sci China Life Sci – 2015. – 58. P. 156–169.Zhang Q., Gui J. F. Virus genomes and virus–host interactions in aquaculture animals // Sci China Life Sci – 2015. – 58. P. 156–169.Walker P., Winton J. «Emerging viral diseases of fish and shrimp»/ Walker P., Winton J. // Veterinary Research. – 2010. – 41 - 51.Walker P., Winton J. «Emerging viral diseases of fish and shrimp»/ Walker P., Winton J. // Veterinary Research. – 2010. – 41 - 51.Yue, Z. Development of a sensitive and quantitative assayfor spring viremia of carp virus based on real-time RT-PCR./ Yue Z., Teng, Y., Liang, C., Xie, X. [et al.]// J. Virol. Methods. – 2008. – P. 43-48.Yue, Z. Development of a sensitive and quantitative assayfor spring viremia of carp virus based on real-time RT-PCR./ Yue Z., Teng, Y., Liang, C., Xie, X. [et al.]// J. Virol. Methods. – 2008. – P. 43-48.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.