мл. науч. сотр. лаб. микробиологии сибирской язвы
Junior Researcher of the Laboratory of Anthrax microbiology
врач-бактериолог, ст. преп. каф. медицинской микробиологии им. акад. З.В. Ермольевой
bacteriologist, Senior Lecturer of the Yermolyeva Department of medical microbiology
лаборант-исследователь лаб. микробиологии сибирской язвы
Laboratory Researcher of the Laboratory of Anthrax microbiology
канд. биол. наук, зам. директора по аналитической работе
PhD in Biology, Deputy Director for Analytical Work
Несмотря на бурное развитие молекулярно-генетических методов исследования, буквально перевернувших наши представления о микроорганизмах, классические для микробиологии методы всё ещё не теряют своей актуальности. Особенно это касается вопросов, когда необходимо установить наличие у бактерии органелл или способности к токсинообразованию. В настоящей статье рассмотрены возможности визуализации параспоральных тел на примере B. thuringiensis с помощью окраски кумасси бриллиантовым синим. В работе использовались штаммы B. thuringiensis ИПМ-3 (Н-1), ИПМ-4 и ИПМ-4, а также штамм B. anthracis ∆ Ames (отрицательный контроль). Из единичных колоний культур, выращенных на агаре Хоттингера, готовили мазки как это принято в лабораторной практике, после чего окрашивали смесью, состоящей из 0,133% кумасси бриллиантового синего (G) в 50% растворе уксусной кислоты, и микроскопировали. Исследование мазков показало, что наилучшая визуализация параспоральных тел достигается при использовании двухсуточной культуры, а также экспозиции красителя в течении 30 минут. В этом случае достигается визуализация параспоральных тел в виде тёмно-синих структур на фоне светло-синих клеток и блестящих овальных спор во всех полях зрения. Предложенный способ окраски позволяет относительно просто визуализировать параспоральные тела, а также споры, что особенно важно при дифференцировке B. anthracis. Кроме того, визуализация спор в случае B. anthracis позволяет оценить качество споруляции, что делает предложенный способ безопасным конкурентом существующих.
Despite the rapid development of molecular genetic methods of research, which have literally overturned our understanding of microorganisms, the classical methods of microbiology still do not lose their relevance. Especially it concerns questions when it is necessary to establish the presence of organelles or toxin-forming ability in a bacterium. In the present article the possibilities of visualisation of parasporal bodies on the example of B. thuringiensis by means of Cumassi Brilliant Blue staining are considered. B. thuringiensis strains IPM-3 (H-1), IPM-4 and IPM-4, as well as B. anthracis ∆ Ames strain (negative control) were used in this work. From single colonies of cultures grown on Hottinger's agar, smears were prepared as is customary in laboratory practice, then stained with a mixture consisting of 0.133% Cumassi Brilliant Blue (G) in 50% acetic acid solution and microscoped. Examination of smears showed that the best visualisation of parasporal bodies is achieved when a two-day culture is used, and dye exposure for 30 minutes. In this case visualisation of parasporal bodies in the form of dark-blue structures on the background of light-blue cells and shiny oval spores in all fields of view is achieved. The proposed staining method allows for relatively simple visualization of parasporal bodies and spores, which is especially important when differentiating B. anthracis from other representatives of the Bacillus cereus complex. In addition, visualization of spores in the case of B. anthracis allows for evaluation of the quality of sporulation, making the proposed method a safe competitor to existing ones.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.