Основными критериями оценки вакцин являются их иммуногенность, специфическая активность и безопасность. Целью данной работы являлась разработка ПЦР в реальном времени для выявления и количественной оценки вирусных нуклеиновых кислот для стандартизации условий производства интраназальной вакцины против респираторных болезней новорожденных телят. Сконструированы комбинации праймеров и зондов (для каждого патогена индивидуально) позволяющие идентифицировать участок гликопротеина G респираторносинцитиального вируса (РСВ) размером 97 п.н. расположенного в области от 4849 до 4945 п.н.; участок 130 п.н P-гена возбудителя ПГ-3 в области от 2856 до 2985 п.н.; локус 171 п.н вируса ИРТ в области от 8271 по 8341 п.н.. Создан и синтезирован положительный контрольный образец (ПКО), представляющий собой замкнутую в кольцо двухцепочную молекулу ДНК (5618 п.н.), содержащую нуклеотидную последовательность, состоящую из сконструированных праймеров и зондов для индикации вирусов ИРТ, ПГ-3 и РСИ. С использованием ПКО определены оптимальные условия постановки количественной ПЦР-РВ и состав реакционной смеси. Минимальная концентрация плазмидной ДНК, при которой регистрировалась успешная амплификация составила 5 аг/мкл, что соответствовало разведению 10-10, при котором в 1 мл раствора содержалось 826 молекул плазмидной ДНК. По результатам амплификации вируссодержащего материала установлены следующие концентрации патогенов: ИРТ – 0,7-1,5 млн копий ДНК/мл, ПГ-3 – 0,1-0,5 млн копий РНК/мл и РСВ – 20-80 тыс. копий РНК/мл. Разработанный способ определения количественного содержания вирусных НК на основе ПЦР-РВ благодаря своим характеристикам является перспективным подходом при организации производства вакцины для профилактики респираторных инфекций молодняка, а также обеспечивает соответствие конечного продукта стандартам качества.