ivmМеждународный вестник ветеринарииInternational Journal of Veterinary Medicine2072-2419SpbGUVM Publishing House10.52419/issn2072-2419.2025.4.97ivm-1871Research ArticleИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИINFECTIOUS DISEASESСовершенствование способа культивирования респираторносинцитиального вируса для создания вакцины против респираторных инфекций телятImproving the method of cultivation of respiratory syncytial virus to create a vaccine against respiratory infections of calveshttps://orcid.org/0000-0002-9056-5798ТарасоваЕ. Ю.TarasovaE. Yu.

канд. биол. наук, зав. лабораторией ветеринарной санитарии, вед. науч. сотр.

Candidate of Biological Sciences, Head of the Laboratory of Veterinary Sanitation Leading Researcher

 

evgenechka1885@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-5669-1486ХаммадовН. И.КhammadovN. I.

канд. биол. наук, зав. лабораторией молекулярно-генетического анализа, вед. науч. сотр. 

Candidate of Biological Sciences, Head of the Laboratory of Molecular Genetic Analysis, Leading Researcher

https://orcid.org/0000-0001-8786-1310ЕфимоваМ. А.EfimovaM. A.

д-р биол. наук, вед. науч. сотр.

Doctor of Biological Sciences, Leading researcher 

https://orcid.org/0000-0002-4520-7596КашеваровГ. С.KashevarovG. S.

канд. биол. наук, зав. лабораторией морфологических исследований, ст. науч. сотр. 

Candidate of Biological Sciences, Head of the Laboratory of Morphological Research, Senior Researcher

https://orcid.org/0000-0002-6771-3457КаримуллинаИ. Г.KarimullinaI. G.

канд. биол. наук, ст. науч. сотр.

Candidate of Biological Sciences, Leading Researcher

https://orcid.org/0000-0002-2468-3163КалимуллинФ. Х.KalimullinF. Kh.

канд. биол. наук, вед. науч. сотр.

Candidate of Biological Sciences

https://orcid.org/0000-0003-3636-0633БыковаП. В.BykovaP. V.

мл. науч. сотр. 

Junior Researcher

ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»РоссияFSBSI «Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety»Russian FederationФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»; ФГБОУ ВО Казанский ГАУ Институт "Казанская академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана"РоссияFSBSI «Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety»; FSBEI HE «Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman»Russian Federation2025301220250497106Copyright © Тарасова Е.Ю., Хаммадов Н.И., Ефимова М.А., Кашеваров Г.С., Каримуллина И.Г., Калимуллин Ф.Х., Быкова П.В., 20252025Тарасова Е.Ю., Хаммадов Н.И., Ефимова М.А., Кашеваров Г.С., Каримуллина И.Г., Калимуллин Ф.Х., Быкова П.В.Tarasova E.Y., Кhammadov N.I., Efimova M.A., Kashevarov G.S., Karimullina I.G., Kalimullin F.K., Bykova P.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vetjournal.spbguvm.ru/jour/article/view/1871

Целью работы являлось изучение особенностей культивирования и определения инфекционной активности штамма респираторно-синцитиального вируса «РБ23» для дальнейшего создания живой аттенуированной импортозамещающей вакцины против ИРТ, ПГ-3 и РСВ для назальной иммунизации новорожденных телят. Качество репликации на клеточных линиях проводили путем оценки инфекционных титров по прямому цитопатическому действию вируса на клетки млекопитающих, а также использовали метод окрашенных фокусов. Методом количественной ПЦР определена степень репликации РСВ на культуре клеток ЛЭК в зависимости от сроков культивирования. Показано, что клетки ЛЭК и Т-1 являются пермессивными для РСВ. При этом чувствительность клеток ЛЭК превышала чувствительность клеток Т-1 на 1,96, 1,88 и 7,69 % соответственно, в трех последовательных пассажах. Смена среды МЕМ с добавлением глутамина при культивировании РСВ на 4 сутки способствовала усилению репликативной активности на 8,6 % по сравнению с флаконами, в которых смена среды не проводилась. Отмечено также, что оптимальным сроком культивирования РСВ является срок семь суток, дальнейшее культивирование приводит к деградации внеклеточных вирусных частиц, что снижает концентрацию вирионов на 26,5-40,0 %. Наработана биомасса РСВ «РБ23» для дальнейшего создания живой аттенуированной импортозамещающей вакцины против ИРТ, ПГ-3 и РСВ для назальной иммунизации новорожденных телят с инфекционным титром РСВ – 4,75±0,18 lg ТЦД 50/см3, титром по ФОЕ – 1,5x106 ФОЕ/см3 и количеством вирионов в вируссодержащей суспензии не ниже 4,5±0,20 млн. копий/мл.

The aim of the work was to study the features of cultivation and determination of the infectious activity of the respiratory syncytial virus strain "RB23" for the further creation of a live attenuated importsubstituting vaccine against IRT, PG-3 and RSV for nasal immunization of newborn calves. The quality of replication on cell lines was carried out by assessing infectious titers by the direct cytopathic effect of the virus on mammalian cells, and also using the stained foci method. The degree of RSV replication on the LEC cell culture depending on the cultivation time was determined by the quantitative PCR method. It was shown that LEC and T-1 cells are permissive for RSV. Moreover, the sensitivity of LEC cells exceeded the sensitivity of T-1 cells by 1.96, 1.88 and 7.69%, respectively, in three consecutive passages. Changing the MEM medium with the addition of glutamine during RSV cultivation on the 4th day contributed to an increase in replicative activity by 8.6% compared to flasks in which the medium was not changed. It was also noted that the optimal period for RSV cultivation is seven days, further cultivation leads to the degradation of extracellular viral particles, which reduces the concentration of virions by 26.5-40.0%. The RSV biomass "RB23" has been produced for further development of a live attenuated import-substituting vaccine against IRT, PG-3 and RSV for nasal immunization of newborn calves with an infectious RSV titer of 4.75±0.18 lg TCID 50/cm3, a FFU titer of 1.5x106 FFU/cm3 and a virion count in a virus-containing suspension of at least 4.5±0.20 million  copies/ml.

перевиваемые линии культур клетокреспираторносинцитиальный вирусвакцинателятаинфекционный титррепликацияколичественная полимеразная цепная реакцияcontinuous cell culture linesrespiratory syncytial virusvaccinecalvesinfectious titerreplicationquantitative polymerase chain reactionReferencesРаспространение респираторно-синцитиальной вирусной инфекции КРС на территории ряда регионов Российской Федерации / С. А. Андреев, А. В. Кононов, А. А. Нестеров, Е. А. Бухон, К. А. Шалина // Молодые ученые - науке и практике АПК : Материалы Международной научно-практической конференции аспирантов и молодых ученых, Витебск, 25–26 апреля 2024 года. – Витебск: Витебская государственная академия ветеринарной медицины, 2024. – С. 21–23.Spread of bovine respiratory syncytial virus infection in a number of regions of the Russian Federation / S. A. Andreev, A. V. Kononov, A. A. Nesterov, E. A. Bukhon, K. A. Shalina // Young scientists - for science and practice of the agro-industrial complex: Proceedings of the International scientific and practical conference of postgraduate students and young scientists, Vitebsk, April 25-26, 2024. - Vitebsk: Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine, 2024. - P. 21-23. (In Russ.)Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота: особенности клинического проявления, патогенеза и молекулярной эпизоотологии (обзор) / С.В. Котенева, А.Г. Глотов, Т.И. Глотова [и др.] // Ветеринария сегодня. – 2025. – № 14(2). – С. 133-139. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2025-14-2-133-139.Bovine respiratory syncytial infection: features of clinical manifestation, pathogenesis and molecular epizootology (review) / S.V. Koteneva, A.G. Glotov, T.I. Glotova [et al.] // Veterinary science today. - 2025. - No. 14 (2). - P. 133-139. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2025-14-2-133-139. (In Russ.)Изучение антигенных свойств ассоциированной вакцины против ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 и хламидиоза крупного рогатого на кроликах / И. Р. Акбашев, С. В. Садыкова, Л. М. Яшагина [и др.] // Ветеринарный врач. – 2024. – № 2. – С. 39–42. https://doi.org/ 10.33632/1998-698X_2024_2_39.Study of antigenic properties of the associated vaccine against IRT, VD-BS, PG-3 and bovine chlamydia in rabbits / I. R. Akbashev, S. V. Sadykova, L. M. Yashagina [et al.] // Veterinarian. - 2024. - No. 2. - P. 39-42. https://doi.org/ 10.33632/1998-698X_2024_2_39. (In Russ.)Bovine respiratory disease during the midportion of the feeding period: Observations from vaccination history, viral and bacterial prevalence, and rate of gain in feedlot cattle / M. E. Theurer, M. D. Johnson, T. Fox [et al.] // Appl. Anim. Sci. – 2021. – № 37. – Р. 59–67. https://doi.org/10.15232/aas.2020-02090Bovine respiratory disease during the mid -portion of the feeding period: Observations from vaccination history, viral and bacterial prevalence, and rate of gain in feedlot cattle / M. E. Theurer, M. D. Johnson, T. Fox [et al.] // Appl. Anim. Sci. – 2021. – № 37. – Р. 59–67. https://doi.org/10.15232/aas.2020-02090Культуральные свойства вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота штамма «АБ 1908» / В.В. Кирпиченко, C.В. Кононова, А.В. Кононов [и др.] // Ветеринария сегодня. – 2019. – № 4. С. 31-36. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-4-31-31-36Cultural properties of the bovine respiratory syncytial virus strain "AB 1908" / V.V. Kirpichenko, S.V. Kononova, A.V. Kononov [et al.] // Veterinary Science Today. - 2019. - No. 4. P. 31-36. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-4-31-31-36 (In Russ.)Коровкин А.С., Горенков Д.В., Волгин А.Р. Профилактика респираторно-синцитиальной вирусной инфекции: современное состояние и перспективы разработки вакцин // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. – 2024. – № 24(3). – С. 255–269. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2024-24-3-255-26Korovkin A.S., Gorenkov D.V., Volgin A.R. Prevention of respiratory syncytial virus infection: current status and prospects for vaccine development // BIOpreparations. Prevention, diagnostics, treatment. - 2024. - No. 24 (3). - P. 255-269. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2024-24-3-255-26 (In Russ.)Vaccination of calves at day of birth with attenuated vaccines against bovine respiratory syncytial virus, bovine parainfluenza type 3 virus and respiratory bovine coronavirus / M. H. van Rooij, M. Schmitz, J. M. H. Meessen [et al.] // Veterinary Vaccine. – 2023. – Vol. 2 (1). – 100014. https://doi.org/10.1016/j.vetvac.2023.100014Vaccination of calves at day of birth with attenuated vaccines against bovine respiratory syncytial virus, bovine parainfluenza type 3 virus and respiratory bovine coronavirus / M. H. van Rooij, M. Schmitz, J. M. H. Meessen [et al.] // Veterinary Vaccine. – 2023. – Vol. 2 (1). – 100014. https://doi.org/10.1016/j.vetvac.2023.100014Comparative effectiveness of intranasal and parenteral vaccines for prevention of bovine respiratory disease in feedlot heifers / J. I. Szasz, T. C. Bryant, K. S. Blood [et al.] // Applied Animal Science. – 2023. – Vol. 39 (5). – P. 273–281. https://doi.org/10.15232/aas.2023-02396Comparative effectiveness of intranasal and parenteral vaccines for prevention of bovine respiratory disease in feedlot heifers / J. I. Szasz, T. C. Bryant, K. S. Blood [et al.] // Applied Animal Science. – 2023. – Vol. 39 (5). – P. 273–281. https://doi.org/10.15232/aas.2023-02396Строганова И. Я., Войтова К. В. Методы обнаружения и идентификации респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культуре клеток // Вестник КрасГАУ. – 2011. – №3. – С. 128-133. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/metody-obnaruzheniya-i-identifikatsiirespiratorno-sintsitialnogo-virusa-krupnogorogatogo-skota-v-kulture-kletok (дата обращения: 04.08.2025).Stroganova I. Ya., Voitova K. V. Methods for detection and identification of bovine respiratory syncytial virus in cell culture // Bulletin of KrasSAU. - 2011. - No. 3. - P. 128-133. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/metody-obnaruzheniya-iidentifikatsii-respiratorno-sintsitialnogovirusa-krupnogo-rogatogo-skota-v-kulturekletok (date of access: 04.08.2025). (In Russ.)Chamorro M. F., Palomares R. A. Bovine respiratory disease vaccination against viral pathogens. Modified-live versus inactivated antigen vaccines, intranasal versus parenteral, what is the evidence? // Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. – 2020. – № 36. – Р. 461–472. https://doi.org/10.1016/j.cvfa.2020.03.006.Chamorro M. F., Palomares R. A. Bovine respiratory disease vaccination against viral pathogens. Modified-live versus inactivated antigen vaccines, intranasal versus parenteral, what is the evidence? // Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. – 2020. – № 36. – Р. 461–472. https://doi.org/10.1016/j.cvfa.2020.03.006.Modified-live versus inactivated respiratory viral vaccines for revaccinating beef calves at weaning / C.A. McNeff, C.A. Robison, B.K. Wilson [et al.] // Applied Animal Science. – 2023. – № 39 (1). – С. 1-13. https://doi.org/10.15232/aas.2022-02332Modified-live versus inactivated respiratory viral vaccines for revaccinating beef calves at weaning / C.A. McNeff, C.A. Robison, B.K. Wilson [et al.] // Applied Animal Science. – 2023. – № 39 (1). – С. 1-13. https://doi.org/10.15232/aas.2022-02332Reed L., Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints // American Journal of Epidemiology. – 1938. – № 27(3). – С. 493-497.Reed L., Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints // American Journal of Epidemiology. – 1938. – № 27(3). – С. 493-497.Calnec, B.W., Ljarrido E., Okazaki W. In vitro methods for assay of turkey herpes virus / V Avian Dis. – 1972. – V.16. – P.52-56. https://n2t.net/ark:/87292/w9sj33Calnec, B.W., Ljarrido E., Okazaki W. In vitro methods for assay of turkey herpes virus / V Avian Dis. – 1972. – V.16. – P.52-56. https://n2t.net/ark:/87292/w9sj33Дизайн праймеров для индикации патогенных лептоспир методом гнездовой полимеразной цепной реакции в режиме реального времени / К.В. Усольцев, Р.И. Шангараев, К.С. Хаертынов [и др.] // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. – 2025. – № 2. – С. 95-106. https://doi.org/10.36871/vet.zoo.bio.202502111Design of primers for the indication of pathogenic leptospira by the nested polymerase chain reaction method in real time / K.V. Usoltsev, R.I. Shangaraev, K.S. Khaertynov [et al.] // Veterinary science, zootechnics and biotechnology. - 2025. - No. 2. - P. 95-106. https://doi.org/10.36871/vet.zoo.bio.202502111 (In Russ.)Дизайн специфических олигонуклеотидов для выявления контаминации культур клеток возбудителем вирусной диареи и микоплазмами при разработке интраназальной вакцины против респираторных болезней новорожденных телят / Н. И. Хаммадов, М. Е. Горбунова, М. А. Ефимова [и др.] // Ветеринарный врач. – 2025. – № 3. – С. 98-104. – https://doi.org/10.33632/1998-698X_2025_3_98.Design of specific oligonucleotides for detection of contamination of cell cultures with the causative agent of viral diarrhea and mycoplasmas in the development of an intranasal vaccine against respiratory diseases of newborn calves / N. I. Khammadov, M. E. Gorbunova, M. A. Efimova [et al.] // Veterinarian. - 2025. - No. 3. - P. 98-104. - https://doi.org/ 10.33632/1998-698X_2025_3_98. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.