ivmМеждународный вестник ветеринарииInternational Journal of Veterinary Medicine2072-2419SpbGUVM Publishing House10.52419/issn2072-2419.2025.4.402ivm-1907Research ArticleБИОХИМИЯ, МОРФОЛОГИЯ, ФИЗИОЛОГИЯBIOCHEMISTRY, ANATOMY, PHYSIOLOGYСравнение биологической активности in vitro секретомов мезенхимальных стволовых клеток, выделенных из жировой ткани лошадиComparison of biological activity in vitro by the secretion of mesenchymal stem cells isolated from adipose tissuehttps://orcid.org/0009-0008-0181-2197ТрифоноваА. В.TrifonovaA. V.

 канд. биол. наук, директор по науке

PhD, Director of Science

trifonova@ns-rabies.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0528-671XАлиС. Г.AliS. G.

канд. биол. наук, начальник НПЛ клеточных технологий

PhD, Head of NPL of Cellular Technologies 

https://orcid.org/0000-0001-9035-0036НечаевА. Ю.NechaevA. Y.

д-р ветеринар. наук, проф., зав. каф. общей, частной и оперативной хирургии, интерн

Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Department of General, Private and Operative Surgery, intern 

https://orcid.org/0000-0002-7732-4420ЛаврикА. А.LavrikA. A.

 ген. директор

 CEO of Stem Renovation LLC 

https://orcid.org/0000-0002-4176-4053МининаА. О.MininaA. O.

канд. ветеринар. наук, доц., доц. каф. общей, частной и оперативной хирургии

PhD, Associate Professor, Associate Profes-sor of the Department of General, Private and Operative Surgery 

ООО «Стэм реновацио»РоссияStem Renovation LLCRussian FederationФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины»; ФГБОУ ВО «Донской государственный технический университет»РоссияSaint Petersburg State University of Veterinary Medicine; Don State Technical UniversityRussian FederationФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины»РоссияDon State Technical UniversityRussian Federation20253012202504402410Copyright © Трифонова А.В., Али С.Г., Нечаев А.Ю., Лаврик А.А., Минина А.О., 20252025Трифонова А.В., Али С.Г., Нечаев А.Ю., Лаврик А.А., Минина А.О.Trifonova A.V., Ali S.G., Nechaev A.Y., Lavrik A.A., Minina A.O.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vetjournal.spbguvm.ru/jour/article/view/1907

Сегодня в регенеративной медицине, традиционно опиравшейся на терапию стволовыми клетками, происходит переход к новому типу биологической регуляции, основанному на межклеточном взаимодействии через секретируемые вещества, известные как секретом. Применение секретома мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в регенеративной терапии обладает рядом преимуществ по сравнению с использованием живых клеток, включая возможность модификации состава секретома для достижения определенных терапевтических целей. В настоящем исследовании впервые описана процедура получения секретома мезенхимальных стволовых клеток лошади с использованием двух отличных методов и проведено сравнительное изучение их биологической активности на модели «раны» in vitro. С помощью программы ToupView 3.7. на фотографиях измеряли ширину «раны» в каждой из 6 точек для каждой лунки через 0 часов инкубирования (сразу после нанесения «царапины») и 24 ч инкубирования. Рассчитывали среднее значение ширины просвета «царапины» в 0ч и 24 ч. Затем рассчитывали отношение средней ширины «царапины» через 24 часа инкубирования к среднему значению ширины «царапины» через 0 часов инкубирования, после чего рассчитывали для каждого образца «степень зарастания раны по отношению к «К». Результат выражали в % по отношению к контролю. Впервые проведена оценка стабильности биологической активности секретома МСК при хранении в температурном диапазоне от +4 до +8оС на протяжении двух месяцев. На основании результатов проведенных исследований будет выбран секретом МСК, являющийся перспективным кандидатом для дальнейших испытаний: сначала на лабораторных животных с целью оценки безопасности при различных путях введения, а затем на лошадях для анализа его влияния на показатели сердечно-сосудистой и дыхательной систем при патологических состояниях как в покое, так и после физической нагрузки.

Today, regenerative medicine, traditionally reliant on stem cell therapy, is shifting toward a new type of biological regulation based on intercellular interactions via secreted substances known as the secretome. The use of mesenchymal stem cell (MSC) secretomes in regenerative therapy offers several advantages over living cells, including the ability to modify the secretome composition to achieve specific therapeutic goals. This study describes for the first time a procedure for obtaining equine mesenchymal stem cell secretomes using two distinct methods and conducts a comparative study of their biological activity in an in vitro wound model. Using ToupView 3.7 software, the wound width was measured in photographs at each of six points for each well after 0 hours of incubation (immediately after the scratch) and 24 hours of incubation. The average "scratch" width was calculated at 0:00 and 24:00. The ratio of the average "scratch" width after 24 hours of incubation to the average "scratch" width after 0:00 was then calculated. The wound closure rate relative to "K" was then calculated for each sample. The result was expressed as a percentage relative to the control. For the first time, the stability of the biological activity of the MSC secretome was assessed during storage at temperatures ranging from +4 to +8°C for two months. Based on the results of these studies, a promising candidate MSC secretome will be selected for further testing: first in laboratory animals to assess safety using various routes of administration, and then in horses to analyze its effects on cardiovascular and respiratory parameters in pathological conditions both at rest and after exercise.

мезенхимальные стволовые клеткикультивированиекондиционированная средаэкстрактсекретоммодель «раны»mesenchymal stem cellscultivationconditioned mediumextractsecretome«wound healing assay»Материалы подготовлены в рамках Российского научного фонда 2025 года «Использование продуктов секреции мезенхимальных стволовых клеток для стимуляции физиологической и репаративной регенерации кардиореспираторной системы у лошадей» (соглашение №25-16-00265 от 29.05.2025).The materials were prepared within the framework of the Russian Science Foundation 2025 "The use of mesenchymal stem cell secretion products to stimulate the physiological and reparative regeneration of the cardiorespiratory system in horses" (Agreement No. 25-16-00265 dated 05/29/2025).ReferencesМезенхимальные стволовые клетки в процессах роста и репарации тканей/ Н.И. Калинина, В.Ю. Сысоева, К.А. Рубина, [и др.] // Acta Naturae. - 2011. - Т.3. - №4. - С. 32-39.Mesenchymal stem cells in the processes of tissue growth and repair/ N.I. Kalinina, V.Y. Sysoeva, K.A. Rubina, [et al.] // Acta Naturae. - 2011. - Vol.3. - No. 4. - pp. 32-39.Mesenchymal stem cell secretome: toward cell-free therapeutic strategies in regenerative medicine / Vizoso F.J., Eiro N., Cid S. [et al.]. // Int J Mol Sci. - 2017. - 18(9). - Р. 1852.Mesenchymal stem cell secretome: towards cell-free therapeutic strategies in regenerative medicine / Vizoso F.J., Eiro N., Cid S. [et al.]. // Int J Mol Sci. - 2017. – 18 (9). - P. 1852.MacDonald, E.S. The Potential of Mesenchymal Stem Cells to Treat Systemic Inflammation in Horses / E.S. MacDonald, J. G. Barrett // Frontiers in Veterinary Science. – 2020. – V. 6. – Р. 507.MacDonald, E.S. The Potential of Mesenchymal Stem Cells to Treat Systemic Inflammation in Horses / E.S. MacDonald, J. G. Barrett // Frontiers in Veterinary Science. – 2020. – V. 6. – P. 507.Лаврик, А. А. Иммуномодулирующие свойства мезенхимальных стволовых клеток: актуальные исследования / А. А. Лаврик, А. В. Трифонова, П. И. Токарь // Наука и инновации - современные концепции: сборник научных статей по итогам работы Международного научного форума, Москва, 21 сентября 2023 года. – Москва: Инфинити, 2023. – С. 83-88.Lavrik, A. A. Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells: current research / A. A. Lavrik, A.V. Trifonova, P. I. Tokar // Science and innovation – modern concepts: a collection of scientific articles based on the results of the International Scientific Forum, Moscow, September 21, 2023. Moscow: Infiniti Publ., 2023, pp. 83-88.Регенеративная медицина для лечения лошадей с респираторными заболеваниями / А. В. Травкина, С. Ю. Концевая, А. А. Лаврик, С. Г. Али // Инновационные решения актуальных проблем в области ветеринарии : материалы Всероссийской (национальной) научно-практической конференции, Курск, 25–26 февраля 2021 года. – Курск: Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова, 2021. – С. 259-263.Regenerative medicine for the treatment of horses with respiratory diseases / A.V. Travkina, S. Y. Kontseva, A. A. Lavrik, S. G. Ali // Innovative solutions to current problems in the field of veterinary medicine: proceedings of the All-Russian (national) scientific and practical Conference, Kursk, February 25-26, 2021. Kursk: Kursk State Agricultural Academy named after I.I. Ivanov, 2021, pp. 259-263.Патент № 2662172 C2 Российская Федерация, МПК A61K 35/28. Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды: № 2016148715: заявл. 13.12.2016: опубл. 24.07.2018 / А. А. Лаврик, Н. Э. Искендерова, С. Г. Али.Patent No. 2662172 C2 Russian Federation, IPC A61K 35/28. Method for obtaining a regenerative veterinary drug based on an extract of mesenchymal stem cells and a conditioned medium: No. 2016148715: application 13.12.2016: published 24.07.2018 / A. A. Lavrik, N. E. Iskenderova, S. G. Ali.A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods / J.C.Yarrow, Z.E.Perlman, N.J. Westwood, T.J. Mitchison // BMC Biotechnol. - 2004. - V 9. - № 4. – P 21.A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods / J.C.Yarrow, Z.E.Perlman, N.J. Westwood, T.J. Mitchison // BMC Biotechnol. - 2004. - V 9. - № 4. – P 21.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.