ivmМеждународный вестник ветеринарииInternational Journal of Veterinary Medicine2072-2419SpbGUVM Publishing Houseivm-518Research ArticleИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИINFECTIOUS DISEASESПрименение методики мультиплексной ПЦР-РВ в молекулярной диагностике ВЛКРС при перинатальном инфицированииThe use of multiplex PCR-RT in molecular diagnosticsof BLV at perinatal infectionКозыреваН. Г.KozyrevaN. G.noemail@neicon.ruФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАНРоссияFederal State Budgetary Research Institution «Federal Scientific Center - All-Russian Scientific Research Institute Of Experimental Veterinary Of The Russian Academy Of Sciences»Russian Federation201802062021042832Copyright © Козырева Н.Г., 20212021Козырева Н.Г.Kozyreva N.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vetjournal.spbguvm.ru/jour/article/view/518

В статье приводятся экспериментальные данные по молекулярной диагностики ретровирусной инфекции, индуцируемой вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) с использованием разработанной на базе ФНЦ ВИЭВ РАН тест-системы на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) в формате мильтиплекс. Проведен анализ 1189 образцов крови телок из хозяйства Московской области в возрасте от 0 дней до 3 месяцев. Из них 710 животных исследовали на вирусоносительство с использованием разработанной ПЦР-РВ тест-системы в формате мультиплекс. Антитела против антигенов ВЛКРС обнаруживали методом РДП с помощью набора ФГУП Курской биофабрики (Россия) в сыворотке крови животных до приема молозива. Провирусную ДНК выделяли из 100 мкл крови с помощью наборов «ДНК-Сорб-В», «Рибо-Преп» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). В качестве положительного контроля ПЦР-РВ использовали ДНК, выделенную из лиофилизированного препарата положительного контрольного антигена ВЛКРС из набора для серологической диагностики методом РДП. На этапе разработки дизайна олигонуклеотидов использовали программу OLIGO DNA/RNA primer analysis, v.4.0 (W.Rychlik, 1989) и референс- последовательность генома ВЛКРС - EF600696. Выявлена тенденция к снижению уровня перинатальной инфицированности в обследованном хозяйстве за определенный период в 3,0 раза. При проведении клинических испытаний обнаружено превышение в 3,2 раза относительной чувствительности методики ПЦР-РВ в формате мультиплекс по сравнению с серологическим методом (РДП) исследования молодняка до приема молозива. В процессе отработки методики на представленном материале показана возможность эффективного применения разработанных олигонуклеотидов для обнаружения ДНК ВЛКРС методом ПЦР-РВ при перинатальном заражении у телят на ранних стадиях заболевания.

The article presents experimental data on the molecular diagnostics of retroviral infection induced by the bovine leukemia virus using the PCR test system developed on the basis of the VIEV RAS multiplex PCR-RT. Circulation of passively acquired colostral antibodies in the body of calves complicates the task of timely diagnosis by serological methods, what makes direct diagnosis of infection at the age of 0-6 months extremely urgent. Based on the results of studies to determine the level of perinatal infection of calves in the dynamics, as part of the implementation and improvement of the scheme of preventive activities in the surveyed farm of the Moscow Region, a tendency to its reduction in 3 times revealed. Using the developed diagnostic test among 710 animals under 3 months of age, the proportion of calves-virus carriers was 6.4%. The possibility of effec tive application of the developed oligonucleotides for DNA detection of BLV by the PCR-RT method for perinatal infection in calves in the early stages of the disease shows in the process of working out the technique on the presented material.

вирус лейкоза крупного рогатого скотамульт иплексная полимеразная цепная реакцияфлуоресцентная детекциядиагностическая мишеньперинатальное инфицированиеbovine leukemia virusmultiplex polymerase chain reactionfluorescent detectiondiagnostic targetperinatal infectionReferencesКозырева, Н.Г. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и генетические варианты возбудителя на территории животноводческих хозяйств Центрального федерального округа Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин // Ветеринария Кубани. - 2017. - № 6. - С. 4 -9.Козырева, Н.Г. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и генетические варианты возбудителя на территории животноводческих хозяйств Центрального федерального округа Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин // Ветеринария Кубани. - 2017. - № 6. - С. 4 -9.Определение генетического статуса изолятов ВЛКРС, распространенных на территории Московской области ЦФО РФ / Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, М.И. Гулюкин // Материалы IX Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Молекулярная диагностика 2017». - Москва, 2017. - Т.2. - С. 394395.Определение генетического статуса изолятов ВЛКРС, распространенных на территории Московской области ЦФО РФ / Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, М.И. Гулюкин // Материалы IX Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Молекулярная диагностика 2017». - Москва, 2017. - Т.2. - С. 394395.Филогенетический анализ участка гена pol изолятов провируса лейкоза КРС, обнаруженных у животных из различных хозяйств регионов Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, А.С. Малоголовкин, А.И. Клименко, В.В. Разумовская // Доклады РАСХН. - 2011. - № 6. - С. 48-51.Филогенетический анализ участка гена pol изолятов провируса лейкоза КРС, обнаруженных у животных из различных хозяйств регионов Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, А.С. Малоголовкин, А.И. Клименко, В.В. Разумовская // Доклады РАСХН. - 2011. - № 6. - С. 48-51.BLV-CoCoMo-qPCR: Quantitation of bovine leukemia virus proviral load using the CoCoMo algorithm / M. Jimba, S.-N. Takeshima, K. Matoba, D. Endoh, Y. Aida // J. Retrovirol. - 2010. - Vol. 7. - P. 91.- Режим доступа: http:// www.retrovirology.com/content/7/1/91. D0I:10.1186/1742-4690-7-91.BLV-CoCoMo-qPCR: Quantitation of bovine leukemia virus proviral load using the CoCoMo algorithm / M. Jimba, S.-N. Takeshima, K. Matoba, D. Endoh, Y. Aida // J. Retrovirol. - 2010. - Vol. 7. - P. 91.- Режим доступа: http:// www.retrovirology.com/content/7/1/91. D0I:10.1186/1742-4690-7-91.Choi, E.A. Mutational analysis of bovine leukemia virus Rex: identification of a dominant-negative inhibitor / E.A. Choi, T.J. Hope // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 71727181.Choi, E.A. Mutational analysis of bovine leukemia virus Rex: identification of a dominant-negative inhibitor / E.A. Choi, T.J. Hope // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 71727181.Haas, L. Bovine leukemia virus gene expression in vivo / L. Haas, T. Divers, J.W. Casey // J. Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 6223-6225.Haas, L. Bovine leukemia virus gene expression in vivo / L. Haas, T. Divers, J.W. Casey // J. Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 6223-6225.Mechanisms of leukemogenesis induced by bovine leukemia virus: prospects for novel anti-retroviral therapies in human / N. Gillet, A Florins, M. Boxus, C. Burteau, A Nigro, F. Vandermeers, H. Balon, A.-B. Bouzar, J. Defoiche, A. Burny, M. Reichert, R. Kettmann, L. Willems // J. Retroviral. - 2007. - Vol. 4. - P. 32. - Режим доступа: https://rstrovirology.biomedcentral.com/ articles/10.1186/1742-4690-4-18. DOI: 10.1186/1742-4690-4-18.Mechanisms of leukemogenesis induced by bovine leukemia virus: prospects for novel anti-retroviral therapies in human / N. Gillet, A Florins, M. Boxus, C. Burteau, A Nigro, F. Vandermeers, H. Balon, A.-B. Bouzar, J. Defoiche, A. Burny, M. Reichert, R. Kettmann, L. Willems // J. Retroviral. - 2007. - Vol. 4. - P. 32. - Режим доступа: https://rstrovirology.biomedcentral.com/ articles/10.1186/1742-4690-4-18. DOI: 10.1186/1742-4690-4-18.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.