к. в. н., доцент
Dr. of vet. Sciences, docent
студ.
student
ветеринарный врач
veterinarian
ESBL (β-лактамазы расширенного спектра) – ферменты, способные расщеплять пенициллины, цефалоспорины и монобактамы и не гидролизующие цефамицины и карбапенемы. Наиболее частыми продуцентами ESBL являются Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae.
Тестирование чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений определяет эффективную дозировку антибиотиков.
Цель работы - изучить минимальную подавляющую концентрацию различных антибиотиков и определить продукцию β-лактамаз для бактерий Klebsiella pneumoniae и Escherichia сoli с помощью планшета Sensititre ESB1F.
В ходе работы использовали два планшета Sensititre ESB1F, в лунках которых содержатся сухие антимикробные препараты в определенных концентрациях, физиологический раствор, бульон Мюллер-Хинтон, автоматическая пипетка на 10 и 50 µл с одноразовыми наконечниками, стандарт Мак-Фарланда 0.5 единиц, чашки с кровяным агаром для контроля чистоты культур.
Учет результатов проводили визуально, регистрируя рост по помутнению среды, формированию пленки или осадка на дне планшета в сравнении с контрольными лунками.
Для учета результатов теста, подтверждающего наличие ESBL, сравнили МПК, полученную для цефтазидима, цефотаксима и МПК, полученную для комбинации этих антибиотиков с клавулановой кислотой (цефтазидим/клавулановая кислота и цефотаксим/клавулановая кислота). Результат теста считали положительным, если разница в МПК превышает два разведения.
Для E. coli МПК цефтазидима и цефтазидима/клавулановой кислоты составили 8 и 0,25/4 соответственно, то есть разница в разведениях – 7; для цефотаксима МПК соответствует 1 мг/л, по отношению к цефотаксиму/клавулановой кислоте исследуемая E. coli оказалась чувствительной при всех исследуемых концентрациях. Для Kl. pneumoniae МПК цефтазидима составила 16, цефтазидима/клавулановой кислоты – 0,5 (разница в 6 разведений); цефотаксима – 2 и цефотаксима/клавулановой кислоты – 0,25 (разница в 3 разведения). Из этого следует, что оба исследуемых микроорганизма продуцируют β-лактамазы расширенного спектра.Сделано заключение о целесообразном применении планшетов Sensititre ESB1F, которые позволяют определить и подтвердить наличие ферментов ESBL у представителей семейства Enterobacteriaceae.
Результаты оценки уровня бета-лактамазной активности позволят сократить необоснованное использование антибактериальных препаратов из группы бета-лактамов.
ESBL (extended spectrum β-lactamases) are enzymes capable for spliting penicillins, cephalosporins and monobactams and not hydrolyzing cephamycins and carbapenems. The most common ESBL producers are Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.
Antibiotic susceptibility testing by serial dilution determines the effective dosage of antibiotics.
The aim of the work is to study the minimum inhibitory concentration of various antibiotics and determine the production of β-lactamase for the bacteria Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli using the Sensititre ESB1F tablet.
In the course of the work, two Sensititre ESB1F plates were used, the wells of which contained dry antimicrobials at certain concentrations, saline, Mueller-Hinton broth, an automatic pipette for 10 and 50 µl with disposable tips, McFarland standard 0.5 units, blood agar plates to control the purity of cultures.
The results were recorded visually, registering growth by cloudiness of the medium, formation of a film or sediment at the bottom of the plate in comparison with the control wells.
To account for the results of the test confirming the presence of ESBL, the MIC obtained for ceftazidime, cefotaxime and the MIC obtained for the combination of these antibiotics with clavulanic acid (ceftazidime/clavulanic acid and cefotaxime/ clavulanic acid) were compared. The test result was considered positive if the difference in MIC was more than two dilutions.
For E. coli, the MICs of ceftazidime and ceftazidime/clavulanic acid were 8 and 0.25/4, respectively, i.e. the difference in dilutions was 7; for cefotaxime, the MIC corresponds to 1 mg/l, with respect to cefotaxime/clavulanic acid, the studied E. coli turned out to be sensitive at all concentrations studied. For Kl. pneumoniae MIC of ceftazidime was 16, ceftazidime/clavulanic acid was 0.5 (difference of 6 dilutions); cefotaxime - 2 and cefotaxime / clavulanic acid - 0.25 (3 dilution difference). It follows from this that both studied microorganisms produce extended spectrum β lactamases.
A conclusion was made about the expedient use of Sensititre ESB1F tablets, which make it possible to determine and confirm the presence of ESBL enzymes in representatives of the Enterobacteriaceae family.
The results of assessing the level of betalactamase activity will reduce the unreasonable use of antibacterial drugs from the group of betalactams.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.