Пилотная оценка согласованности различных методов лабораторной диагностики при выявлении Babesia spp. у лошадей

Пироплазмидозы лошадей сохраняют значение в ветеринарной практике вследствие возможности острого течения и формирования латентного носительства, при котором лабораторное выявление возбудителя затруднено. Цель исследования состояла в пилотной оценке согласованности результатов микроскопии окрашенных мазков крови, локальной скрининг-ПЦР и лабораторной ПЦР с детекцией в режиме реального времени при выявлении Babesia spp. у лошадей различного клинического статуса. Обследованы 14 животных. У всех выполнены клинический осмотр, микроскопия тонких мазков периферической крови, скрининг-ПЦР с использованием коммерческого набора для выявления ДНК Babesia spp. и исследование в аккредитованной ветеринарной лаборатории, результаты которого приняты за метод сравнения. Полный протокол лабораторного метода не раскрывался, поэтому его использовали как сравнительный, а не абсолютный референсный метод. Клинические признаки, совпадающие с острым течением инвазии, зарегистрированы у 3 из 14 животных, у которых возбудитель выявлен микроскопически и скрининг-ПЦР. Лабораторная ПЦР дала положительный результат у 10 из 14 лошадей, включая клинически здоровых животных, отрицательных по рутинным методам. Положительное процентное согласие микроскопии и локальной скрининг-ПЦР с методом сравнения составило по 30,0 %, отрицательное процентное согласие составило 100,0 и 75,0 %, соответственно. Коэффициент Каппа-Коэна составил 0,196 и 0,034 при слабой согласованности. Показатели приведены с 95 % доверительными интервалами по методу Уилсона. Отрицательный результат рутинных методов не исключает инвазию Babesia spp. у клинически здоровых лошадей. Полученные оценки предварительны и требуют проверки на расширенной выборке с применением валидированного референсного метода.

1. Марченко, В. А. Иксодовые инвазии лошадей, сезонная динамика и зараженность пастбищных клещей пироплазмидами в Горном Алтае / В. А. Марченко, В. А. Рар, Бирюков И. В. // Российский паразитологический журнал. 2023. Т. 17, № 3. С. 352—364. DOI 10.31016/1998-8435-2023-17-3-352-364.

2. Tirosh-Levy S., Gottlieb Y., Fry L.M., Knowles D.P., Steinman A. Twenty Years of Equine Piroplasmosis Research: Global Distribution, Molecular Diagnosis, and Phylogeny. Pathogens. 2020;9(11):926. DOI: 10.3390/pathogens9110926.

3. Onyiche T. E., Taioe M. O., Molefe N. I., Biu A. A., Luka J., Omeh I. J., Yokoyama N., Thekisoe O. M. M. Equine piroplasmosis: an insight into global exposure of equids from 1990 to 2019 by systematic review and meta—analysis. Parasitology. 2020;147(13):1411—1424. DOI: 10.1017/s0031182020001407

4. Rar V., Marchenko V., Suntsova O., Epikhina T., Tikunov A., Meltsov I., Fedorets V., Igolkina Y., Kozlova I., Tikunova N. The first study of the prevalence and genetic diversity of Theileria equi and Babesia caballi in horses in Russia. Parasitology Research. 2024;123:279. DOI: 10.1007/s00436-024-08300-3.

5. Onyiche T. E., Suganuma K., Igarashi I., Yokoyama N., Xuan X., Thekisoe O. M. M. A Review on Equine Piroplasmosis: Epidemiology, Vector Ecology, Risk Factors, Host Immunity, Diagnosis and Control. International Journal of Environmental Research and Public Health. 2019;16(10):1736. DOI: 10.3390/ijerph16101736.

6. Onyiche T. E., Taioe M. O., Molefe N. I., Biu A. A., Luka J., Omeh I. J., Yokoyama N., Thekisoe O. New insights in the diagnosis and treatment of equine piroplasmosis: pitfalls, idiosyncrasies, and myths. Frontiers in Veterinary Science. 2024;11:1459989. DOI: 10.3389/fvets.2024.1459989.

7. Lv K., Zhang Y., Yang Y., Liu Z., Deng L. Development of Nested PCR and Duplex Real—Time Fluorescence Quantitative PCR Assay for the Simultaneous Detection of Theileria equi and Babesia caballi. Frontiers in Veterinary Science. 2022;9:873190. DOI: 10.3389/fvets.2022.873190.

8. Nardini R., Bartolomé Del Pino L.E., Cersini A., Manna G., Viola M.R., Antognetti V., Autorino G.L., Scicluna M.T. Comparison of PCR—based methods for the detection of Babesia caballi and Theileria equi in field samples collected in Central Italy. Parasitology Research. 2021;120:2157—2164. DOI: 10.1007/s00436-021-07153-4.

9. Venter A., Vorster I., Nkosi N.F., Sibeko—Matjila K.P., Bhoora R. Molecular genotyping of Babesia caballi. Veterinary Parasitology. 2024;329:110214. DOI: 10.1016/j.vetpar.2024.110214.

10. Дёмкина, О. В. Гельминтологический статус спортивных и племенных лошадей, вывозимых за пределы Российской Федерации / О. В. Дёмкина, И. А. Соловьева и др. // Международный вестник ветеринарии. 2023. № 3. С. 74—78. DOI 10.52419/issn2072-2419.2023.3.74.

11. Mège M., Bonsergent C., Viry L., Dhune M., Lecollinet S., Malandrin L. Genetic diversity of equine piroplasmosis agents in Guadeloupe (Caribbeans): first report of Theileria haneyi, evaluation of diagnostic tools and impact of horse movement. Ticks and Tick-borne Diseases. 2025;16(6):102547. DOI: 10.1016/j.ttbdis.2025.102547.

12. Bishop R.P., Kappmeyer L.S., Onzere C., Odongo D., Githaka N., Sears K.P., Knowles D.P., Fry L.M. Equid infective Theileria cluster in distinct 18S rRNA gene clades comprising multiple taxa with unusually broad mammalian host ranges. Parasites & Vectors. 2020;13:261. DOI: 10.1186/s13071-020-04131-0.

13. Giubega S., Dreghiciu C., Ilie M.S., Dărăbuş G. Diagnostic methods used for the detection of Theileria equi: review of the last decade. Cluj Veterinary Journal. 2022;27(2):16—24. DOI: 10.52331/cvj.v27i2.37.

14. Atabek B., Zhyldyz A., Aitakin K., Rysbek N., Jailobek O., Ahedor B., Mumbi N. N. M., Ma Y., Otgonsuren D., Perera W., Guswanto A., Sivakumar T., Yokoyama N. Molecular prevalence and genotypic diversity of Theileria equi and Babesia caballi infecting horses in Kyrgyzstan. Parasitology International. 2024;102:102915. DOI: 10.1016/j.parint.2024.102915.

15. Landis J.R., Koch G.G. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics. 1977;33(1):159—174. DOI: 10.2307/2529310.

16. Lobanov V. A., Peckle M., Massard C. L., Scandrett W. B., Gajadhar A. A. Development and validation of a duplex real-time PCR assay for the diagnosis of equine piroplasmosis. Parasites & Vectors. 2018;11(1):125. DOI: 10.1186/s13071-018-2751-6.

17. Dorrego A., Camino E., Gago P., Buendia-Andres A., Acurio K., Gonzalez S., de Juan L., Cruz-Lopez F. Haemato-biochemical characterization of equine piroplasmosis asymptomatic carriers and seropositive, real-time PCR negative horses. Veterinary Parasitology. 2023;323:110046. DOI: 10.1016/j.vetpar.2023.110046.

18. Salinas-Estrella E., Ueti M.W., Lobanov V.A., CastilloPayró E., Lizcano-Mata A., Badilla C., Martínez-Ibáñez F., Mosqueda J. Serological and molecular detection of Babesia caballi and Theileria equi in Mexico: A prospective study. PLOS ONE. 2022;17(3):e0264998. DOI: 10.1371/journal.pone.0264998.