Разработка и апробация тест-системы для полимеразной цепной реакции с целью выявления альфа-токсина Clostridium Perfringens

При распространении клостридиозов нарушается эпидемиологическая и эпизоотическая безопасность, степень которой зависит от иммунологического статуса животного, лечебных и профилактических мер в животноводческом комплексе, токсигенности бактерии и степени тяжести болезни. Бактерия Clostridium perfringens распространена повсеместно, продуцирует 20 различных токсинов и факторов патогенности, одним из которых является альфатоксин, который обнаруживается в мясе и других биологических пробах, что угрожает биобезопасности животноводческих предприятий, рынков, магазинов и др. Статья посвящена разработке и апробации тест-системы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с целью обнаружения ДНК гена, кодирующего альфатоксин штамма Clostridium perfringens CP322, широко распространенного на территории Российской Федерации. Синтез олигонуклеотидов, предложенный коллективом ученых из Кореи Chon J.W., Park J.S., Hyeon J.Y., Park C., Song K.Y., Hong K.W., Hwang I.G., Kwak H.S., Seo K.H. в 2012 году послужил основой для создания и апробации тестсистемы [1].
Оптимизация методики диагностики, подбор верных концентраций реагентов и ДНК в образцах от крупного рогатого скота, синтез высокоспецифичных праймеров и модернизация молекулы зонда послужили основой для разработки тест-системы, апробация которой прошла на 319 образцах – биоматериале, полученном от крупного рогатого скота. Предложенный метод молекулярно-генетической диагностики позволит ветеринарным специалистам своевременно идентифицировать возбудителя энтеротоксемии в исследуемых пробах, комплексно поставить диагноз с учетом эпизоотических, клинических, патологоанатомических и лабораторных данных, назначить эффективное лечение и разработать план мероприятий по профилактике развития и распространения инфекции.

1. Chon, J.W. Development of real-time PCR for the detection of Clostridium perfringens in meats and vegetables. / J. W. Chon, J. S. Park, J. Y. Hyeon [и др.] // Journal of Microbiology and Biotechnology. – 2012. – Vol. 22, Is. 4. – P. 530-534. DOI: 10.4014/jmb.1107.07064.

2. Yang, C. C. Clinical significance and outcomes of Clostridium perfringens bacteremia --a 10-year experience at a tertiary care hospital. / C. C. Yang, P. C. Hsu, H. J. Chang [и др.]. // Int J Infect Dis. – 2013. – Vol. 17, Is. 11. – e955-60. DOI: 10.1016/j.ijid.2013.03.001.

3. Лобзин, Ю. В. Современные представления об этиопатогенетических и генетических особенностях токсинов Clostridium perfringens / А. С. Кветная, Н. В. Скрипченко, Л. И. Железова – DOI 10.36233/0372-9311-37. – Текст : электронный // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. – 2021. – Т. 98. – № 1. – С. 91-97. – URL: https://microbiol.crie.ru/jour/article/view/1304 (дата обращения: 12.10.2022)

4. Козлова, А. Д. Использование молекулярно-генетических методов для типирования Clostridium perfringens / А. Д. Козлова, Н. С. Горбачева, О. В. Клименкова [и др.] // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. – Вып. 63. – № 3. – 2017. – C. 188-194.

5. Микробиологическая безопасность мяса, мясных продуктов и пищевых яиц: Учебно-методическое пособие по направлению подготовки 36.04.01 "Ветеринарно-санитарная экспертиза", уровень высшего образования магистратура / Л. И. Смирнова, А. А. Сухинин, Е. И. Приходько [и др.]. – Санкт-Петербург: Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, 2018. – 52 с. – EDN MSDYPY.

6. Смирнова, Л. И. Клиническая ветеринарная микробиология: учебное пособие. / Л. И. Смирнова, С. А. Макавчик. – СПб.: ВВМ, 2022. – С. 228.

7. Макавчик, С.А. Лабораторные методы контроля полирезистентных возбудителей бактериальных болезней животных и рационального применения антимикробных препаратов: монография / С. А. Макавчик, А. А. Сухинин, С. В. Енгашев [и др.] // СПб.: Изд-во ВВМ, 2021. – 152 с.

8. Erol I. Molecular typing of Clostridium perfringens isolated from turkey meat by multiplex PCR. / M. Goncuoglu, N.D. Ayaz, F.S. Bilir Ormanci, G. Hildebrandt // Lett Appl Microbiol. 2008 Jul;47(1):31-4. doi: 10.1111/j.1472-765X.2008.02379.x. Epub 2008 Jun 12.

9. Rood, J. I. Expansion of the Clostridium perfringens toxin-based typing scheme. / J. I. Rood, V. Adams, J. Lacey // Anaerobe. – 2018. – P. 5-10. DOI: 10.1016/J.anaerobe.2018.04.011.

10. Моисеева, К. А. ПЦР-диагностика штаммов Clostridium perfringens в исследуемом материале крупного рогатого скота / К. А. Моисеева, А. А. Сухинин // Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны : материалы XI международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, Санкт-Петербург, 24–25 ноября 2022 года. – Санкт-Петербург: Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины, 2022. – С. 275-276.