Применение синтетического пептида на основе иммуногенного эпитопа GP51 для серологической диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота

Диагностика лейкоза остается одной из ключевых проблем при проведении оздоровительных мероприятий в неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах. В Российской Федерации для выявления возбудителя лейкоза применяются различные методы, в том числе серологические, одним из которых является иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип непрямого варианта ИФА заключается в выявлении комплекса, образованного антигеном, иммобилизованном на поверхности лунок полистиролового планшета и специфическими антителами, содержащимися в пробах сыворотки крови или молоке крупного рогатого скота. Настоящая работа посвящена изучению возможности применения синтетического пептида, представляющего собой аминокислотную последовательность эпитопов белка gp51 вируса лейкоза, в качестве антигена для ИФА при индикации вируса лейкоза крупного рогатого скота. Для разработки способа ИФА нами был сконструирован и синтезирован антиген – синтетический пептид BLVpep (NCKYSNQCGDQGSFYVNHQILFLHLKQCHGIFTLTWEIWNC). С целью наилучшей сенсибилизации данного пептида были отработаны основные параметры постановки ИФА. В частности, определена оптимальная концентрация пептида для сенсибилизации планшета – 1,0 мкг/мл, блокирующего раствора – 3% раствор сухого обезжиренного молока, антивидового пероксидазного конъюгата – 1:40000, подобран реакционный буфер взаимодействия «антиген-антитело» – ФСБ-Т (рН 7,3), установлен минимальный титр антител к возбудителю, выявляемый в сыворотках крови больных лейкозом коров – 1:1600. Представленный в настоящей работе способ ИФА может быть использован как основа при создании тест-системы для выявления возбудителя лейкоза крупного рогатого скота и найти широкое применение в ветеринарной практике для серологической диагностики.

1. Захарова, Ю. Н. Оценка лабораторных методов диагностики лейкоза КРС и анализ экономического ущерба / Ю. Н. Захарова, О. В. Ланец // Научный диалог: Молодой ученый : Сборник научных трудов по материалам III международной научной конференции, Санкт-Петербург, 22 января 2017 года. – Санкт-Петербург: Центр Научных Конференций Международной Научно-Исследовательской Федерации "Общественная наука", 2017. – С. 50-52. – doi 10.18411/spc-22-01-2017-2-11.

2. Агольцев, В. А. Сравнительная диагностическая оценка серологического и молекулярно-генетического методов лабораторных исследований на лейкоз крупного рогатого скота / В. А. Агольцов, Е. С. Красникова, А. А. Щербаков [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. – 2012. – № 4 (90). – С. 56-59.

3. Эпизоотическая ситуация в Российской Федерации 2022 год. ФГБУ ВНИИЗЖ АИЦ Управления ветнадзора г. Владимир. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL: – https://fsvps.gov.ru/sites/default/files/files/iac/iac_epizooticheskaya_situaciya_v_rf_2022_god.pdf, свободный. – (дата обращения: 2.08.2023).

4. Шангараев, Р. И. Мониторинг эпизоотической ситуации лейкоза крупного рогатого скота в Республике Татарстан с применением молекулярно-генетических и серологических методов диагностики / Р. И. Шангараев, М. Е. Горбунова, Р. Ф. Сафина [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. – 2023. – № 1(219). – С. 58-64. – doi 10.53083/1996-4277-2023-219-1-58-64.

5. Донник, И. М. Лейкоз крупного рогатого скота - диагностика, оздоровление, антропозоонозный потенциал (история вопроса) (обзор) / И. М. Донник, М. И. Гулюкин, В. А. Бусол [и др.] // Сельскохозяйственная биология. – 2021. – Т. 56, № 2. – С. 230-244. – doi 10.15389/agrobiology.2021.2.230rus.

6. Мукантаев, К. Н. Современные аспекты серологической диагностики энзоотического лейкоза крупного рогатого скота / К. Н. Мукантаев, К. К. Муканов, А. В. Шустов [и др.] // Биотехнология. Теорияипрактика. – 2012. – № 3. – С. 3-15.

7. Meas, S. Seroprevalence and molecular evidence for the presence of bovine immunodeficiency virus in Brazilian cattle / S. Meas, F. J. Ruas, T. Usui [et al.] // Japanese Journal of Veterinary Research. – 2002 – Vol. 50, №1. – P. 9–16

8. Усольцев, К. В.Изучение возможности использования синтетических пептидов для обнаружения присутствия вирионов возбудителя энзоотического лейкоза в организме человека и животных / К. В. Усольцев, Р. Ф. Сафина, М. Е. Горбунова [и др.] // Физико-химическая биология как основа современной медицины : тезисы докладов участников Международной научной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения профессора Е. В. Барковского, Минск, 21 мая 2021 года / Министерство здравоохранения Республики Беларусь; Белорусский государственный медицинский университет. – Минск: Белорусский государственный медицинский университет, 2021. – С. 308-309.

9. Bai, L. Antigenicity of subregions of recombinant bovine leukemia virus (BLV) glycoprotein gp51 for antibody detection. / L. Bai, M. Soya, M. Ichikawa //J Virol Methods. 2023. – 311:114644. doi: 10.1016/j.jviromet.2022.114644.

10. Suzuki, A. Phylogenetic Analysis of South African Bovine Leukaemia Virus (BLV) Isolates / A. Suzuki, R. Chapman, N. Douglas s[et al.] // Viruses. – 2020. – Vol. 8. – P. 898.

11. Gorbunova, M. E. A new approach to the diagnosis of enzootic leukosis by genetic markers of bovine leukemia virus / M. E. Gorbunova, R. F. Safina, K. V. Usoltcev [et al.] // Biointerface Research in Applied Chemistry. – 2022. – Vol. 12, No. 4. – P. 4448-4462. doi 10.33263/BRIAC124.44484462.

12. Горбунова, М. Е. Разработка способа экспресс диагностики лейкоза крупного рогатого скота, основанного на обнаружении гена нуклеокапсидного белка р24 методом ПЦР в режиме реального времени / М. Е. Горбунова // Ветеринарный врач. 2016. – № 6. – С. 3-7.

13. Giuseppe, A. D. Expression of the Bovine Leukemia Virus Envelope Glycoprotein (gp51) by Recombinant Baculovirus and Its Use in an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay /A. D. Giuseppe, F. Feliziani, D. Rutili, G. M. De Mia / Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 2004. – V. 11. - №1. – Р.147–151.