Реакция диффузионной преципитации с использованием рекомбинантного белка vp2 вируса инфекционной бурсальной болезни

Инфекционная бурсальная болезнь (ИББ) – это высококонтагиозная, иммунодепрессивная вирусная болезнь молодняка птиц, наносящее значительный экономический ущерб птицеводческой отрасли во всем мире. Вакцинация является наиболее важной мерой борьбы с ИББ. В промышленном птицеводстве все чаще и чаще применяются векторные вакцины против данной болезни (Vaxxitek HVT + IBD, VECTORMUNE® HVT-IBD). Их особенностью является синтез белка VP2 вируса ИББ, который является главным протективным антигеном при данной болезни. К сожалению, в Российской Федерации отсутствуют отечественные наборы для определения поствакцинальных титров антител на данные вакцины, поэтому разработка отечественных серологических наборов на белок VP2 вируса ИББ является актуальным направлением исследований на сегодняшний день. Цель настоящей работы – изучить специфичность рекомбинантного белка VP2, синтезированного в бактериальной системе экспрессии, в реакции диффузионной преципитации (РДП). В результате проведенных исследований на базе ФГБОУ ВО СПбГУВМ и ФГБОУ ВО СПбГУ получены штаммы Escherichia coli, которые синтезируют полноразмерный белок VP2 в концентрации 90 мкг/мл. Данный белок был использован как антиген в РДП в диагностическом разведении 1:8 с положительной сывороткой кур кросса Lohmann Brown в количестве 10 шт. с титром антител на вирус ИББ в ИФА (1:10 000). Были показаны полосы преципитации в агаровом геле и установлено, что синтезированный белок VP2 является специфичным. Полученные данные свидетельствуют об эффективном использовании рекомбинантных антигенов в качестве компонентов диагностических наборов.

1. Веретенников, В. В. Идентификация вируса инфекционной бурсальной болезни методом диффузной преципитации / В. В. Веретенников // Материалы 73-й международной научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ, Санкт-Петербург, 08–17 апреля 2019 года. – Санкт-Петербург: СанктПетербургская государственная академия ветеринарной медицины, 2019. – С. 47-48.

2. Джавадов, Э. Вирусные болезни: диагностика и профилактика / Э. Джавадов // Животноводство России. – 2015. – № S1. – С. 7-10.

3. Jackwood DJ, Henderson KS, Jackwood RJ (1996) Enzyme-linked immunosorbent assay-based detection of antibodies to antigenic subtypes of infectious bursal disease viruses of chickens. Clin Diagn Lab Immunol 3(4):456–463

4. Martinez-Torrecuadrada JL, Lazaro B, Rodriguez JF, Casal JI (2000) Antigenic properties and diagnostic potential of baculovirus-expressed infectious bursal disease virus proteins VPX and VP3. Clin Diagn Lab Immunol 7:645–651.

5. Синтез рекомбинантных белков вируса инфекционной бурсальной болезни в бактериальной системе / В. В. Веретенников, Н. В. Тарлавин, Э.Д. Джавадов, А. М. Румянцев // Ветеринарный фармакологический вестник. – 2022. – No 4(21). – С. 22-29. – DOI 10.17238/issn2541-8203.2022.4.22.

6. А. Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). М.: Наука, 1981.

7. Б. Schneider, C., Rasband, W. & Eliceiri, K. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods 9, 671–675 (2012). https://doi.org/10.1038/nmeth.2089

8. Сравнение чувствительности РДП и ИФА при обнаружении антигена вируса инфекционного энцефаломиелита птиц и специфических антител к нему / А. Э. Меньщикова, В. Н. Ирза, Н. В. Беляева [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. – 2007. – Т. 5. – С. 361-366.