Контроль жизнеспособности и стабильности биологических свойств референтного штамма Brucella canis RM 6/66 при длительном хранении

Бруцеллез собак, вызываемый бруцеллой вида canis, все больше приобретает важное эпизоотологическое и эпидемиологическое значение во всем мире и наносит большой экономический ущерб собаководству. Сохранение патогенов в жизнеспособном состоянии с их первоначальными свойствами в течение длительного времени имеет первостепенное значение при разработке и производстве биопрепаратов профилактического, диагностического и лечебного назначения. Данную функцию выполняют Государственные коллекции микроорганизмов. Целью данной работы было изучить референтный штамм Brucella canis RM 6/66, хранившийся более 20 лет в лиофилизированном виде, определив его жизнеспособность и изучив биологические свойства, и таксономическую принадлежность. Полученные нами результаты показали, что исследуемый штамм при посеве на питательные среды, соответствующие данному виду возбудителя. Исследование его биологических свойств, с помощью тестов для определения диссоциации, показало, что штамм диссоциирован, в виду чего проведен отбор и отсев колоний, окрашенных по Уайт-Вилсону. Получена чистая культура штамма Brucеlla canis RM 6/66 в R-форме (колонии темно-фиолетовые, с ровными краями и неровной поверхностью). Использование ПЦР-РВ метода идентификации с применением видоспецифичных праймеров и TagMan-зонда, показало, что штамм B. canis RM 6/66 по всем десяти локусам соответствует представленному в международных базах, данных референтному штамму.

1. Carmichael L. E., Kenney R. M. Canine abortion caused by Brucella canis // Journal of the American Veterinary Medical Association. 1968. № 6 (152). Р. 605-616.

2. Вершилова П.А. Бруцеллез. М.: Медицина, 1972. 439 с.

3. Косилов И.А. Изменчивость бруцелл и ее значение в проблеме бруцеллеза сельскохозяйственных животных: автореф. на соиск. ученой степ. д-ра вет. наук: 16.00.03 -ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология. Фрунзе, 1975. 39 с.

4. Генджиева О.Б., Руденко А.В. Эпизоотология и эпидемиология бруцеллеза в республике Калмыкии // Вестник Калмыкского универститета. 2013. № 1(17). С.10-15. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-2-23-27.

5. СанПиН 3.3686-21. Санитарноэпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней: санитарно-эпидемиологические правила и нормативы: издание официальное: утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача РФ А. Ю. Поповой 28 января 2021 г. № 4: введены впервые: дата введения 2021-01-09 // Официальный электронный фонд правовых и нормативно-технических документов. – URL: https://docs.cntd.ru/document/573660140 (дата обращения: 24.08.2024).

6. Cordon J.C., Pue H.L., Rutgers H.C. Canine brucellosis in Nouschold // J.A.V.M.A. 1985. № 7(186). P. 695-698. DOI: 10.3389/fvets.2021.594291.

7. Р. Юсупова. Обеспечение благополучия свиноводческих хозяйств от особо опасных инфекций // Доклад заместителя директора ФГБУ «ФЦТРБВНИВИ» (Казань) на Международном ветеринарном конгрессе в Казани. URL: https://soyanews.info/news/obespechenie_blagopoluchiya_svinovodcheskikh_khozyaystv_ot_osobo_opasnykh_infekts.html (дата обращения: 24.08.2024).

8. Зинова А.А. Разработка РИД-тестсистемы для диагностики бруцеллеза собак, вызываемого В. canis: автореф. на соиск. ученой степ. канд. биол. наук: 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологиеи и иммунология. М., 2009. 22 с.

9. Артемьева Е. А., Мельникова Л. А., Родионов А. П. К 45-летию деятельности Государственной коллекции штаммов – возбудителей особо опасных болезней, используемых в ветеринарии и животноводстве // Инновационные решения актуальных вопросов биобезопасности: материалы Международной научнопрактической конференции. Казань. 2022. С. 145-148.

10. Общие фармакопейные статьи на препараты пробиотики для государственной фармакопеи РФ XIII издания - первый опыт в мировой фармакопейной практике / И.Г. Осипова [и др.] // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2016. № 6(2): С. 272–277.

11. Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты. М.: Колос, 1981. 448 с.

12. Гришкина Т.А., Тимофеева Е.В., Спиридонов В.А. Оценка результатов хранения музейных штаммов возбудителя сапа в течение длительного периода // Проблемы особо опасных инфекций. 2004. № 87. С. 40-42.

13. Цуцаева А.А., Ананьина А.Е. Изучение влияния некоторых параметров процесса лиофилизации на жизнеспособность споровой культуры Strepfomyces fradiae ВНИИГ – 25А // Проблемы криобиологии. 2002. № 2. С. 26–915. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-3-66-70.

14. ГОСТ 33675-2015. Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Бактериологические методы: межгосударственный стандарт Российской Федерации: издание официальное: утвержден и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 ноября 2015 г. № 1949-ст: введен впервые: дата введения 2017-01-01 / разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»). М.: Стандартинформ, 2016. 20 с.

15. Подбор оптимальных условий постановки ПЦР для идентификации возбудителя бруцеллеза собак / Е. А. Анисимова [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2023. № 12(230). С. 55-59. DOI: 10.53083/1996-4277-2023-230-12-55-59.

16. Разработка мультиплексной ПЦР-РВ тест-системы для выявления возбудителя бруцеллеза / Е. А. Громова [и др.] // Ветеринарный врач. 2024. № 3. С. 34 – 4018. DOI: 10.33632/1998-698Х_2024_3_34.

17. Изучение морфологических свойств изолятов бруцелл в S- и R-формах электронно-микроскопическим методом / А. Р. Сансызбай [и др.] // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2013. № 12 (110). С. 074-079.

18. Применение HRM-анализа кривых плавления, полученных после амплификации VNTR-локусов, для идентификации и дифференциации штаммов бруцелл / Е.А. Анисимова [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. 2023. № 4. С. 42–49. DOI: 10.21055/0370-1069-2023-4-42-49.