Разработка олигонуклеотидных праймеров для идентификации материала вируса весенней виремии карпа (Cyprinus carpio) полимеразно-цепной реакции

Весенняя виремия карпа является контагиозным заболеванием, поражающая карповых, в первую обыкновенного карпа (Cyprinus carpio). Это заболевание является эндемичным в Европе, Америке и ряде азиатских стран, где оно вызывает значительную заболеваемость и смертность пораженных рыб. Международное эпизоотическое бюро включило весеннюю виремию карпа в список заболеваний, подлежащих уведомлению. Вирус выделяется в основном с калом и мочой клинически инфицированных рыб и самими носителями. Диагноз должен быть подтверждён нейтрализацией вируса или полимеразной цепной реакцией (ПЦР) и анализом нуклеотидной последовательности продуктов ПЦР. Статья посвящена разработке праймеров для полимеразно-цепной реакции в режиме реального времени с целью обнаружения геном вируса весенней виремии карпа. Исследования проводились на базе ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория» в Краснодарском крае, г. Кропоткин. У карпов отбор проб осуществлялся путем взятия тканевого материала и экссудата из брюшной полости. Подбор праймеров осуществлялся на кафедре «Биологии, экологии, паразитологии, водных биоресурсов и аквакультуры» ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ. Материалом исследования служили 4 пробы органов от карповых рыб поступившие в ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория». Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени проводили в объеме реакционной смеси 25 мкл на 1 пробу РНК. Детекция исследуемых образцов осуществлялась на амплификаторе «CFX 96 Bio-Rad». Флуоресценцию измеряли по каналам на 5` конце с красителем FAM/green и на 3`- конце гасителем BHQ1. В результате проведения ПЦР-РВ были выявлены 6 кривых флуоресценции, вместе с двумя положительными контролями пересекающие линию Threshold. Полученные результаты проведенной реакции свидетельствуют об их хорошей воспроизводимости и достоверности. Созданные нами праймеры на весеннюю виремию карпа можно применять в научно-исследовательских и диагностических целях при проведении лабораторных исследований.

1. Барышникова, Е. И. Диагностика весенней виремии карпа методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени / Е. И. Барышникова, М. Е. Сенина, Ю. П. Щелкунова // Ветеринария. – 2022. – № 11. – С. 66-72.

2. Завьялова Е.А., Дрошнев А.Е., Булина К.Ю., Карпова М.А. Мониторинг эпизоотической ситуации по болезням рыб: факты и перспективы. Труды ВИЭВ. 2018; 80 (1):182 – 189.

3. Грищенко, Л. И. Патолого-морфологические изменения и патогенез при весенней виремии карпов / Л. И. Грищенко // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. – 2015. – № 1. – С. 23-25.

4. Пичуева, А. А. Вспышка весенней виремии карповых рыб в Приволжском федеральном округе РФ в 2014 году / А. А. Пичуева, М. И. Доронин // Ветеринария сегодня. – 2015. – № 4(15). – С. 66-70.

5. Ahne W., Spring viremia of carp (SVC) / W. Ahne, H.V. Björklund, S. Essbauer [et al.] // Dis.Aquat. Organ. – 2002. - № 52. – P. 261–272.

6. Грищенко Л.И., Акбаев М. Ш. Болезни рыб и основы рыбоводства. М.: Колос, 2013. – С. 456.

7. Miller O. Phylogenetic analysis of spring virema of carp virus reveals distinct subgroups with common origins for recent isolates in North America and the UK [et al.] O. Miller, F.G. Fuller, Gebreyes W.A.// Diseases of Aquatic Organisms. – 2007. – Vol. 76. P. 193-204.

8. Garcia-Valtanen P. Autophagy-inducing peptides from mammalian VSV and fish VHSV rhabdoviral G glycoproteins (G) as models for the development of new therapeutic molecules. / P. García-Valtanen, M. M. Ortega-Villaizán, A. Martínez-López. [et al.]// Autophagy. -2014. – Vol.10. P.1666– 1680.

9. Usama Ashraf, Spring viraemia of carp virus: recent advances/ Usama Ashraf, Lu Yuanan , Lin Li [et al.]// Journal of General Virology. – 2016. – Vol. 97. P. 1037–1051.

10. Zhang Q., Gui J. F. Virus genomes and virus–host interactions in aquaculture animals // Sci China Life Sci – 2015. – 58. P. 156–169.

11. Walker P., Winton J. «Emerging viral diseases of fish and shrimp»/ Walker P., Winton J. // Veterinary Research. – 2010. – 41 - 51.

12. Yue, Z. Development of a sensitive and quantitative assayfor spring viremia of carp virus based on real-time RT-PCR./ Yue Z., Teng, Y., Liang, C., Xie, X. [et al.]// J. Virol. Methods. – 2008. – P. 43-48.