Определение селективных модуляторов прогестеронового рецептора в плазме крови методом ВЭЖХ-МС/МС

Высокоэффективная жидкостная хроматомасс-спектрометрия (ВЭЖХ-МС) является комбинированным способом химического анализа и интегрирует независимые друг от друга операции жидкостной хроматографической дифференциации и массспектрометрического исследования, что позволяет эффективно определять концентрацию различных веществ в сложных по составу субстанциях. В работе установлены оптимальные параметры определения в плазме крови крупного рогатого скота прогестерона, 17 - гидроксипрогестерона капроната (17-OHPC) и аглепристона данным методом. Количественное определение указанных стероидов, осуществляли с применением внешнего стандарта (абсолютная калибровка). Для этого предварительно строили градуировочные зависимости с использованием эталонных разведений лекарственных веществ. В целях предупреждения воздействия на результат анализа составных компонентов крови практиковали способ матричной градуировки с включением в калибровочные растворы «чистой» плазмы, т.е. не содержавшей определяемые соединения. Опытным путем установлено, что время выхода пика прогестерона происходит через 2,72 минуты, а оптимальным ион - прекурсором является m/z=315,3. В ходе проведенной работы доказано, что разработанный метод позволяет эффективно определять эндогенный уровень прогестерона в плазме крови у животных, по параметрам, заданным для синтетического аналога. Время выхода пика 17-OHPC происходило через 4,20 минуты, а оптимальный ион-прекурсор имел массу 429,2 а.е.м. Первый этап по изучению кинетики 17-OHPC в организме крупного рогатого скота показал, что стероид хорошо визуализируется на хроматограмме даже в невысоких концентрациях. Выход пика аглепристона наблюдался на 2,25 минуте, а оптимальный ион - прекурсор был равен 432,2 а.е.м. Хроматограмма даже при низких концентрациях стероида имела низкий уровень шума, а концентрация стероида в плазме крови через сутки после инъекции 20 мл 3% раствора аглепристона лактирующей корове составила 7,2 нг/мл. Таким образом, подобраны оптимальные параметры для определения концентрации в плазме крови крупного рогатого скота селективных модуляторов прогестеронового рецептора, что позволяет проводить дальнейшую детальную оценку фармакокинетических свойств данных стероидов после их применения.

1. Enzyme linked immunosorbent assay screening then indirect immunofluorescence conformation of antinuclear antibodies / Copple S.S. [et all] // American society for clinical pathology.–2011.–Vol. 135.–P. 678-684.

2. Garber, E. Detection of melamine using commercial enzyme linked immunosor bent assay technology / E. Garber // Journal of food protection.–2008.–Vol. 71,№ 3.–P. 590-594.

3. Meis PJ, Klebanoff M, Thom E, Dombrowski MP, Sibai B, Moawad AH, et al. . Prevention of recurrent preterm delivery by 17 alpha-hydroxyprogesterone caproate. N Engl J Med. (2003) 348:2379–85.

4. Santhosh, C. R. (2006). Pharmacokinetics of 17α-Hydroxy Progesterone Caproate in Cattle, Buffalo, Sheep and Goat (Doctoral dissertation, Karnataka Veterinary, Animal and Fisheries Sciences University, Bidar). http://krishikosh.egranth.ac.in/handle/1/68575

5. Vittorio, A., Brigandi, A., Costabile, L., Abate, F.G., Balzano, E. and Perino, M., 17-alpha-Hydroxyprogesterone caproate and natural progesterone in assisted reproduction: a comparative study. Clin. Exp. Obstet. Gynecol. (2004), 24:190-2.

6. Бессонова Е.А. Хроматографическое и электрофоретическое определение стероидов и биогенных аминов в биологических объектах// Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук. Санкт-Петербург, 2004.–20С.

7. Николаев С.В., Конопельцев И.Г. Пиометра у коров: распространение и терапия // Ветеринария. 2020. № 12. С. 39-43. DOI: 10.30896/0042-4846.2020.23.12.39-43