МИНИМАЛЬНЫЕ ПОДАВЛЯЮЩИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ

ESBL (β-лактамазы расширенного спектра) – ферменты, способные расщеплять пенициллины, цефалоспорины и монобактамы и не гидролизующие цефамицины и карбапенемы. Наиболее частыми продуцентами ESBL являются Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae.

Тестирование чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений определяет эффективную дозировку антибиотиков.

Цель работы - изучить минимальную подавляющую концентрацию различных антибиотиков и определить продукцию β-лактамаз для бактерий Klebsiella pneumoniae и Escherichia сoli с помощью планшета Sensititre ESB1F.

В ходе работы использовали два планшета Sensititre ESB1F, в лунках которых содержатся сухие антимикробные препараты в определенных концентрациях, физиологический раствор, бульон Мюллер-Хинтон, автоматическая пипетка на 10 и 50 µл с одноразовыми наконечниками, стандарт Мак-Фарланда 0.5 единиц, чашки с кровяным агаром для контроля чистоты культур.

Учет результатов проводили визуально, регистрируя рост по помутнению среды, формированию пленки или осадка на дне планшета в сравнении с контрольными лунками.

Для учета результатов теста, подтверждающего наличие ESBL, сравнили МПК, полученную для цефтазидима, цефотаксима и МПК, полученную для комбинации этих антибиотиков с клавулановой кислотой (цефтазидим/клавулановая кислота и цефотаксим/клавулановая кислота). Результат теста считали положительным, если разница в МПК превышает два разведения.

Для E. coli МПК цефтазидима и цефтазидима/клавулановой кислоты составили 8 и 0,25/4 соответственно, то есть разница в разведениях – 7; для цефотаксима МПК соответствует 1 мг/л, по отношению к цефотаксиму/клавулановой кислоте исследуемая E. coli оказалась чувствительной при всех исследуемых концентрациях. Для Kl. pneumoniae МПК цефтазидима составила 16, цефтазидима/клавулановой кислоты – 0,5 (разница в 6 разведений); цефотаксима – 2 и цефотаксима/клавулановой кислоты – 0,25 (разница в 3 разведения). Из этого следует, что оба исследуемых микроорганизма продуцируют β-лактамазы расширенного спектра.Сделано заключение о целесообразном применении планшетов Sensititre ESB1F, которые позволяют определить и подтвердить наличие ферментов ESBL у представителей семейства Enterobacteriaceae.

Результаты оценки уровня бета-лактамазной активности позволят сократить необоснованное использование антибактериальных препаратов из группы бета-лактамов.

1. Макавчик С.А. Гипермукоидные фенотипы Klebsiella pneumoniae и проблемы антибиотикотерапии сельскохозяйственных животных/ Макавчик, С.А.// Вопросы нормативноправового регулирования в ветеринарии. -2019. -№ 4.- С. 48-51.

2. Макавчик С.А., Сухинин А.А., Енгашев С.В., Кротова А.Л. Лабораторные методы контроля полирезистентных возбудителей бактериальных болезней животных и рациональное применение антимикробных препаратов: монография. – Санкт-Петербург: изд-во ВВМ, 2021. – 152 с.: ил.

3. Макавчик С.А. Рациональная фармакотерапия животных с основами ранжирования антимикробных препаратов в ветеринарных лабораториях /Макавчик, С.А.// Ветеринария. - 2022. - № 2. - С. 9-12.

4. Смирнова Л.И. Атипичные биологические свойства и чувствительность к антимикробным препаратам микроорганизмов - возбудителей мастита/ Смирнова, Л.И., Макавчик, С.А., Сухинин, А.А., Кузьмин, В.А., Фогель, Л.С.// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2020.- № 4.- С. 62-66.

5. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals; Approved Standard – Fourth Edition. CLSI document VET01-A4. Available at: www.clsi.org.

6. European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). MIC distributions and ECOFFs https://mic.eucast.org/search/.

7. EUCAST. Экспертные правила определения чувствительности к антибиотикам EUCAST. Доступно по адресу: https://www.eucast.org/expert.org/expert_rules_and_intrinsic_resistence/