К вопросу об идентификации многоядной мухи-горбатки Megaselia scalaris (Loew)

Многоядная  муха-горбатка  (лат.  Megaselia  scalaris (Loew)) является карантинным объектом в Российской Федерации и внесена в Единый перечень карантинных объектов Евразийского экономического союза, утвержденный  Решением  Совета  Евразийской  экономической комиссии от 30.11.2016 № 158, т.к. является переносчиком опасных заболеваний, несущих большой экономический ущерб. Ареал охватывает большие территории Северной Америки, Африки, южной части Европы, Австралии, Юго-Восточной Азии, а также европейскую часть России, а именно Южный федеральный округ и республика Крым. Перечень подкарантинной продукции, подлежащей исследованиям с целью выявления M. scalaris (Loew) очень обширный, а точная идентификации до вида полученных образцов энтомологическим методом по морфологическим признакам копулятивных органов затруднена. Поэтому для идентификации разработаны методы молекулярной диагностики, а именно сравнение исследуемой нуклеотидной последовательности с референсной, с помощью базы NCBI и определение генетических дистанций.  Исследования  проводили  в  отделе  молекулярных  исследований  Северо-Западной  испытательной  лаборатории  ФГБУ «ВНИИЗЖ». В  работе  использовалось  6 образцов рода Megaselia. На первом этапе выделяли ДНК при помощи наборов «ДНК-Экстран 2». Затем генетические маркеры получали методом классической ПЦР с последующей детекцией с помощью электрофореза, используя прибор T100 Thermal Cycler, секвенировли на генетическом анализаторе 3500 Genetic Analyzer. Идентификацию проводили путем сравнения полученной последовательности в программе BioEdit при помощи базы NCBI и путем расчета генетических дистанций, используя двухпараметрическую модель Кимуры и модель Тадзимы-Нэя. В ходе исследования были выявлены преимущества и недостатки представленных методов молекулярной идентификации.

1. Boehme P., Amendt J., Disney R.H.L., Zehner R. 2010. Molecular identifications of carrion-breeding scuttle flies (Diptera: Phoridae) using COI barcodes. International Journal of Legal Medicine, 124: 577-581.

2. Borgmeir T.A. 1968. A Catalogue of the Phoridae of the World (Diptera, Phoridae). Studia Entomologica, 11: 1-367;

3. Cover F. 1991. Insect and Mite Pests in Food: An Illustrated Key. Vol 1. U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service: 767.

4. Kimura M. 1980. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. Journal of molecular evolution. Vol. 16. № 2. P. 11–120.

5. Кузнецов, В. М. Методы Нея для анализа генетических различий между популяциями / В. М. Кузнецов // Проблемы биологии продуктивных животных. – 2020. – № 1. – С. 91-110.