Сравнение методов морфологической оценки сперматозоидов баранов с использованием набора SPERM BLUE и окрашивания по Романовскому-Гимзе

Целью настоящего исследования являются апробация и сравнительная оценка методов морфологического исследования сперматозоидов баранов с использованием набора дифференцированного окрашивания Sperm Blue и окрашивания по Романовскому-Гимзе. Было проведено взятие и исследование спермы баранов породы Дорпер. Для проведения морфологической оценки сперматозоидов, полученные образцы (n=10) разводили в соотношении 1:100 (фосфатным буферным солевым раствором PBS). Для морфологической оценки сперматозоидов использовали два метода: набор дифференцированного окрашивания Sperm Blue (Microptic, экспозиция мазка в фиксаторе - 10 минут, в основном красителе – 18 минут) и окрашивание по Романовскому-Гимзе (экспозиция мазка в фиксаторе - 10 минут, в основном красителе – 20 минут). После рутинного окрашивания промывали мазки дистиллированной водой, высушивали и проводили микроскопию (увеличение с использованием объектива 100х10, иммерсионное масло) с последующим ручным методом подсчета количества морфологических форм сперматозоидов (200 сперматозоидов в каждом образце). Согласно результатам сравнительного анализа окрашенных мазков, окрашивание красителем Sperm Blue позволяет провести детальное морфологическое исследование и определить тератозооспермические характеристики сперматозоидов. При окрашивании по Романовскому-Гимзе нормальные сперматозоиды были четко видны, вместе с тем плохо визуализировалась акросома. Стоит отметить, что подсчет процента нормальных сперматозоидов вручную с использованием обоих красителей привел к одинаковому десятичному результату. Была обнаружена статистически незначимая разница в дефектах головки и хвоста между использованными красителями (p = 0,41 и p = 0,77 соответственно): при окрашивании по Романовскому-Гимзе (7,8% и 34,1%) были обнаружены данные дефекты чаще, чем Sperm Blue (6,3% и 32,9%). Учитывая полученные результаты, актуальным является использование красителя Sperm Blue в ветеринарной андрологии, в частности для оценки морфологии сперматозоидов разных видов животных с дальнейшей разработкой соответствующих протоколов в аспекте длительности экспозиции самих мазков в основном красителе.

1. Баженова, Н. Б. Оценка качественных показателей спермы животных: учебно-методическое пособие / Н. Б. Баженова, К. В. Племяшов, Е. А. Корочкина. – Санкт-Петербург: Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины, 2023. – 25 с. Режим доступа: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=54902245

2. ГОСТ 32222–2013.Средства воспроизводства. Сперма. Методы отбора проб. – Веден 2015-01-27. – М.: Стандартинформ, 2018. – 10 с.

3. Корочкина, Е. А. Репродуктивная способность самцов в условиях стресса и методы ее коррекции: Учебно-методическое пособие / Е. А. Корочкина, Е. Ю. Финагеев, В. В. Никитин. – Санкт-Петербург: ООО "Издательство "ЛЕМА", 2023. – 31 с. – ISBN 978-5-00105-861-8.

4. Корочкина, Е. А. Оценка морфологии сперматозоидов баранов с помощью набора быстрого дифференцированного окрашивания Диахим-Дифф-Квик / Е. А. Корочкина, Е. Ю. Финагеев, М. М. Ивановская // Ветеринария. – 2023. – № 7. – С. 38-42. – DOI 10.30896/0042-4846.2023.26.7.38-42. Режим доступа: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=54146135

5. Способы подготовки самцов-пробников и использование их в репродуктивной биотехнологии: Учебно-методическое пособие для вузов / К. В. Племяшов, Е. Ю. Финагеев, Е. А. Корочкина [и др.]. – Санкт-Петербург: Издательство Лань, 2023. – 52 с. – (Высшее образование). – ISBN 978-5-507-46892-8.

6. Chenoweth, P. J. (2005). Genetic sperm defects. Theriogenology, 64(3), 457–468. 10.1016/J.THERIOGENOLOGY.2005.05.005

7. Farias L.B. Comparison of Diff-Quick and Spermac Staining Methods for Sperm Morphology Evaluation / L.B. Farias, da Cunha Barreto-Vianna AR, de Mello MD, Dos Santos AL, da Fonte Ramos C, Fontoura P. J Reprod Infertil. 2023 Jul-Sep;24(3):166-170. doi: 10.18502/jri. v24i3.13272. Режим доступа: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37663429/

8. Kolster, K. A. (2018). Evaluation of canine sperm and management of semen disorders. Veterinary Clinics of North America – Small Animal Practice, 48(4), 533–545. 10.1016/j.cvsm.2018.02.003. Режим доступа: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29678334/

9. Peña Martínez, A. I. (2004). Canine fresh and cryopreserved semen evaluation. Animal Reproduction Science, 82–83, 209–224. 10.1016/J.ANIREPROSCI.2004.04.024. Режим доступа: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378432004000788

10. Van der Horst G. SpermBlue: a new universal stain for human and animal sperm which is also amenable to automated sperm morphology analysis / G. Van der Horst, L. Maree Biotech // Histochem. 2009 Dec;84 (6):299-308.