Идентификация Pasteurella multocida методом полимеразно цепной реакции

Пастереллез имея достаточно широкое распространение может являться причиной, сдерживающей успешное развитие птицеводства. Причины и условия возникновения данного заболевания в хозяйствах за частую носит не определенный характер. Pasteurella multocida может проявлять себя от крайне ослабленного при пастерелло-носительстве до сильновирулентного возбудителя болезни. Переболевшая птица является скрытым носителем данного заболевания и в дальнейшем подлежит выбраковки. Все это в конечном итоге приводит к значительным экономическим потерям. Быстрое и достоверное обнаружение данного возбудителя позволит снизить или совсем предотвратить экономические потери. Клиническое проявление заболевания в виде молниеносного течения вызывает затруднения его прижизненной диагностики. Целью нашей работы явилась разработка уникальных образцов олигонуклеотидных последовательностей праймеров специфичных к возбудителю P. multocida. Предлагаемый метод обеспечит выявление Pasteurella multocida в течение 3-4 часов, а также быстрое и высокоспецифичное определение типа этой бактерии. Проведя анализ генома Pasteurella multocida нами была выбрана область гена ptfA для конструирования олигонуклеотидов. Для проведения ПЦР была отобрана пара праймеров: Pm0567, Pm1321. Сиквенсы генов выравнивали, подбирая схожие у абсолютно всех исследованных изолятов Pasteurella multocida. Используя специальные компьютерные программы была оценена специфичность подобранных праймеров. В результате поиска в базе данных последовательностей выявлена 100% гомология выбранных праймеров лишь с гомологичными последовательностями в геноме Pasteurella multocida. Исследование проб, содержащих патологические агенты бактериальной природы методом ПЦР, подтвердило специфичность выбранных праймеров. Положительные результаты были получены только с пробами, содержащими Pasteurella multocida. Таким образом, подобранные праймеры могут быть предложены для исследования проб разного состава для выявления генома Pasteurella multocida.

птица, паст ереллёз, ПЦР, праймеры, проба, poultry, pasteurellosis, PCR, primers, sample

1. Новикова О.Б. Микрофлора, выделяемая в птицехозяйствах различного технологического направления и контроль бактериальных болезней птиц / Новикова О.Б., Павлова М.А // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2018. - № 3. - С. 34-36.

2. Чужебаева Г.Д Диагностика пастереллеза крупного рогатого скота методом ПЦР / Монография Г. Д. Чужебаевой // Костанай: Костанайский государственный университет имени Ахмета Байтурсынова. - 2017. - 106с.

3. Peng 2, Liang W., Wang Y. et al. Experimental pathogenicity and complete genome characterization of a pig origin Pasteurella multocida serogroup F isolate HN07 // Vet. Microbiol. - 2017. - Vol. 198. - P. 23-33.

4. Adhikary S., Bisgaard M., Foster G. et al. Comparative study of PCR methods to detect Pasteurel-la multocida // Berl. Munch. Tierarztl. Woch-enschr. - 2013. - Vol. 126. - P. 415422.

5. Wilkie I.W., Harper M., Boyce J.D., Adler B. Pasteurella multocida: diseases and pathogenesis // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2012. - Vol. 361. -P. 1-22.