Применение методики мультиплексной ПЦР-РВ в молекулярной диагностике ВЛКРС при перинатальном инфицировании

В статье приводятся экспериментальные данные по молекулярной диагностики ретровирусной инфекции, индуцируемой вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) с использованием разработанной на базе ФНЦ ВИЭВ РАН тест-системы на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) в формате мильтиплекс. Проведен анализ 1189 образцов крови телок из хозяйства Московской области в возрасте от 0 дней до 3 месяцев. Из них 710 животных исследовали на вирусоносительство с использованием разработанной ПЦР-РВ тест-системы в формате мультиплекс. Антитела против антигенов ВЛКРС обнаруживали методом РДП с помощью набора ФГУП Курской биофабрики (Россия) в сыворотке крови животных до приема молозива. Провирусную ДНК выделяли из 100 мкл крови с помощью наборов «ДНК-Сорб-В», «Рибо-Преп» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). В качестве положительного контроля ПЦР-РВ использовали ДНК, выделенную из лиофилизированного препарата положительного контрольного антигена ВЛКРС из набора для серологической диагностики методом РДП. На этапе разработки дизайна олигонуклеотидов использовали программу OLIGO DNA/RNA primer analysis, v.4.0 (W.Rychlik, 1989) и референс- последовательность генома ВЛКРС - EF600696. Выявлена тенденция к снижению уровня перинатальной инфицированности в обследованном хозяйстве за определенный период в 3,0 раза. При проведении клинических испытаний обнаружено превышение в 3,2 раза относительной чувствительности методики ПЦР-РВ в формате мультиплекс по сравнению с серологическим методом (РДП) исследования молодняка до приема молозива. В процессе отработки методики на представленном материале показана возможность эффективного применения разработанных олигонуклеотидов для обнаружения ДНК ВЛКРС методом ПЦР-РВ при перинатальном заражении у телят на ранних стадиях заболевания.

вирус лейкоза крупного рогатого скота, мульт иплексная полимеразная цепная реакция, флуоресцентная детекция, диагностическая мишень, перинатальное инфицирование, bovine leukemia virus, multiplex polymerase chain reaction, fluorescent detection, diagnostic target, perinatal infection

1. Козырева, Н.Г. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и генетические варианты возбудителя на территории животноводческих хозяйств Центрального федерального округа Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин // Ветеринария Кубани. - 2017. - № 6. - С. 4 -9.

2. Определение генетического статуса изолятов ВЛКРС, распространенных на территории Московской области ЦФО РФ / Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, М.И. Гулюкин // Материалы IX Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Молекулярная диагностика 2017». - Москва, 2017. - Т.2. - С. 394395.

3. Филогенетический анализ участка гена pol изолятов провируса лейкоза КРС, обнаруженных у животных из различных хозяйств регионов Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, А.С. Малоголовкин, А.И. Клименко, В.В. Разумовская // Доклады РАСХН. - 2011. - № 6. - С. 48-51.

4. BLV-CoCoMo-qPCR: Quantitation of bovine leukemia virus proviral load using the CoCoMo algorithm / M. Jimba, S.-N. Takeshima, K. Matoba, D. Endoh, Y. Aida // J. Retrovirol. - 2010. - Vol. 7. - P. 91.- Режим доступа: http:// www.retrovirology.com/content/7/1/91. D0I:10.1186/1742-4690-7-91.

5. Choi, E.A. Mutational analysis of bovine leukemia virus Rex: identification of a dominant-negative inhibitor / E.A. Choi, T.J. Hope // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 71727181.

6. Haas, L. Bovine leukemia virus gene expression in vivo / L. Haas, T. Divers, J.W. Casey // J. Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 6223-6225.

7. Mechanisms of leukemogenesis induced by bovine leukemia virus: prospects for novel anti-retroviral therapies in human / N. Gillet, A Florins, M. Boxus, C. Burteau, A Nigro, F. Vandermeers, H. Balon, A.-B. Bouzar, J. Defoiche, A. Burny, M. Reichert, R. Kettmann, L. Willems // J. Retroviral. - 2007. - Vol. 4. - P. 32. - Режим доступа: https://rstrovirology.biomedcentral.com/ articles/10.1186/1742-4690-4-18. DOI: 10.1186/1742-4690-4-18.