Применение методики мультиплексной ПЦР-РВ в молекулярной диагностике ВЛКРС при перинатальном инфицировании
Аннотация
В статье приводятся экспериментальные данные по молекулярной диагностики ретровирусной инфекции, индуцируемой вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) с использованием разработанной на базе ФНЦ ВИЭВ РАН тест-системы на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) в формате мильтиплекс. Проведен анализ 1189 образцов крови телок из хозяйства Московской области в возрасте от 0 дней до 3 месяцев. Из них 710 животных исследовали на вирусоносительство с использованием разработанной ПЦР-РВ тест-системы в формате мультиплекс. Антитела против антигенов ВЛКРС обнаруживали методом РДП с помощью набора ФГУП Курской биофабрики (Россия) в сыворотке крови животных до приема молозива. Провирусную ДНК выделяли из 100 мкл крови с помощью наборов «ДНК-Сорб-В», «Рибо-Преп» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). В качестве положительного контроля ПЦР-РВ использовали ДНК, выделенную из лиофилизированного препарата положительного контрольного антигена ВЛКРС из набора для серологической диагностики методом РДП. На этапе разработки дизайна олигонуклеотидов использовали программу OLIGO DNA/RNA primer analysis, v.4.0 (W.Rychlik, 1989) и референс- последовательность генома ВЛКРС - EF600696. Выявлена тенденция к снижению уровня перинатальной инфицированности в обследованном хозяйстве за определенный период в 3,0 раза. При проведении клинических испытаний обнаружено превышение в 3,2 раза относительной чувствительности методики ПЦР-РВ в формате мультиплекс по сравнению с серологическим методом (РДП) исследования молодняка до приема молозива. В процессе отработки методики на представленном материале показана возможность эффективного применения разработанных олигонуклеотидов для обнаружения ДНК ВЛКРС методом ПЦР-РВ при перинатальном заражении у телят на ранних стадиях заболевания.
Список литературы
1. Козырева, Н.Г. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и генетические варианты возбудителя на территории животноводческих хозяйств Центрального федерального округа Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин // Ветеринария Кубани. - 2017. - № 6. - С. 4 -9.
2. Определение генетического статуса изолятов ВЛКРС, распространенных на территории Московской области ЦФО РФ / Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, М.И. Гулюкин // Материалы IX Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Молекулярная диагностика 2017». - Москва, 2017. - Т.2. - С. 394395.
3. Филогенетический анализ участка гена pol изолятов провируса лейкоза КРС, обнаруженных у животных из различных хозяйств регионов Российской Федерации / Н.Г. Козырева, М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, А.С. Малоголовкин, А.И. Клименко, В.В. Разумовская // Доклады РАСХН. - 2011. - № 6. - С. 48-51.
4. BLV-CoCoMo-qPCR: Quantitation of bovine leukemia virus proviral load using the CoCoMo algorithm / M. Jimba, S.-N. Takeshima, K. Matoba, D. Endoh, Y. Aida // J. Retrovirol. - 2010. - Vol. 7. - P. 91.- Режим доступа: http:// www.retrovirology.com/content/7/1/91. D0I:10.1186/1742-4690-7-91.
5. Choi, E.A. Mutational analysis of bovine leukemia virus Rex: identification of a dominant-negative inhibitor / E.A. Choi, T.J. Hope // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 71727181.
6. Haas, L. Bovine leukemia virus gene expression in vivo / L. Haas, T. Divers, J.W. Casey // J. Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 6223-6225.
7. Mechanisms of leukemogenesis induced by bovine leukemia virus: prospects for novel anti-retroviral therapies in human / N. Gillet, A Florins, M. Boxus, C. Burteau, A Nigro, F. Vandermeers, H. Balon, A.-B. Bouzar, J. Defoiche, A. Burny, M. Reichert, R. Kettmann, L. Willems // J. Retroviral. - 2007. - Vol. 4. - P. 32. - Режим доступа: https://rstrovirology.biomedcentral.com/ articles/10.1186/1742-4690-4-18. DOI: 10.1186/1742-4690-4-18.
Для цитирования:
Козырева Н.Г. Применение методики мультиплексной ПЦР-РВ в молекулярной диагностике ВЛКРС при перинатальном инфицировании. Международный вестник ветеринарии. 2018;(4):28-32.
For citation:
Kozyreva N.G. The use of multiplex PCR-RT in molecular diagnosticsof BLV at perinatal infection. International Journal of Veterinary Medicine. 2018;(4):28-32. (In Russ.)
Просмотров: 6
Послать статью по эл. почте 